多通道二维色谱分离松多酚及对抗氧化物质的活性跟踪

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二维色谱是分离、分析复杂组分物质的最有效方法之一,有着传统分离技术无法比拟的优点,能快速、有效地将复杂组分分离成单一组分物质,但是其分离纯化量少,多应用于微量物质的分析鉴定,欠缺制备方面研究和应用。因此本课题组在二维色谱和传统柱色谱的基础上,设计构建了多通道二维色谱分离设备,研究其在制备方面的应用。本文以多通道二维色谱为研究基础,以松多酚为研究对象,系统的研究了多通道二维色谱分离松多酚的工艺条件、多通道二维色谱对松多酚抗氧化物质的活性跟踪以及其抗氧化功能研究。研究的主要内容如下:根据多通道二维色谱的设计原理,成功构建了多通道二维色谱分离设备;然后以蓝莓果渣为原料,采用两种不同规格的色谱柱进行多通道二维色谱分离效果的验证实验,结果显示,较蓝莓果渣提取液,多通道二维色谱分离的蓝莓花色苷的纯度有很大提高,最大提高了8.59倍,可推知多通道二维色谱对天然植物活性物质具有分离能力。以红松松塔为原料,选取固相介质、洗脱剂、上样量、上样浓度、洗脱速度以及色谱柱数量6个因素为研究对象,对多通道二维色谱分离松多酚的条件进行优化。通过静态吸附和解吸实验,确定了吸附和解吸效果均佳的X-5大孔树脂作为固相介质,解吸效果最优的0.5%甲酸-60%乙醇溶液为洗脱剂。然后,利用多通道二维色谱设备进行单因素动态实验及响应面优化实验,确定上样量、上样浓度、洗脱速度和色谱柱数量4个因素的最佳值,结果分别为260mg、2.0mg/mL、200±20ml/min和4色谱柱联用。此条件下,多通道二维色谱分离设备对多酚的分离有着很好的效果,使松多酚纯度由2.37%提高到了20.36%,纯化倍数高达8.59倍。采用MTT法测定总还原能力最强组分和羟自由基清除能力最佳组分对小鼠脾细胞的增殖作用,结果显示,两抗氧化组分对小鼠脾细胞具有促增殖作用,总还原能力最强组分在5.0ug/ml浓度时,脾细胞的增殖率最高,可达15%左右;羟自由基清除能力最强组分在20ug/ml浓度时,脾细胞增殖率最好,可达10%。采用H2O2诱导法构建小鼠脾细胞氧化损伤模型,在氧化损伤防护实验中,两抗氧化组分对脾细胞氧化损伤均具有一定的防护作用,总还原能力最强组分在高剂量(160ug/ml)时对脾细胞氧化损伤的防护效果最佳,而羟自由基清除能力最佳组分在中剂量(40ug/ml)时效果最佳。在修复实验中,2种抗氧化组分均在中剂量时对脾细胞氧化损伤的修复效果较佳,高、低剂量对脾细胞氧化损伤没有明显的修复作用。同时在成分分析中,2种抗氧化组分的活性成分多酚、黄酮和花青素的含量比分别为250:75:7和785:350:1。综上所述,本文从多通道二维色谱的构建、分离松多酚条件的优化以及抗氧化物质的活性跟踪三个方面展开对多通道二维色谱和松多酚的研究,取得了较好的成果。这些成果对于活性物质的分离和松多酚的应用提供了很好的技术参考和理论指导,为二维色谱和松多酚的进一步研究奠定了基础。
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