瑞替普酶(Reteplase, rPA)是组织型纤溶酶原激活剂(Tissue-type plasminogen activator, t-PA)的突变体,它能高效特异地与血栓中的纤维蛋白结合,产生的rPA-纤维蛋白复合物能高效特异性地激活血凝块中的纤溶酶原,产生纤溶酶,使纤维蛋白降解成可溶性产物,达到血块溶解,栓塞的血管重新畅通的目的。通过PCR扩增得到rPA的基因片断,将该基因片断克隆到载体pET40b中,构建得到pET40b-rPA重组质粒。在载体pET40b中有二硫键异构酶DsbC,它是大肠杆菌重要的二硫键合成酶之一,可以显著提高重组蛋白质二硫键的正确形成并实现其可溶性表达。经双酶切及测序结果证明得到正确的重组质粒之后,转化到大肠杆菌BL21中进行诱导表达。分别用IPTG和乳糖对重组质粒进行诱导表达,在诱导浓度、诱导持续时间、温度等参数上确定了最佳诱导条件,并对IPTG和乳糖最佳诱导条件进行了比较。利用乳糖作为诱导剂可以起到很好的诱导表达效果,诱导产物的表达量、可溶性及酶活与IPTG诱导产物基本接近,同时乳糖所具备的无毒和价廉的优点,使得其在重组蛋白的大规模发酵生产中,具有优于IPTG的潜在价值和优势。用BCA蛋白定量法计算得到在上清中的可溶性目的蛋白的含量占总蛋白量的40%。诱导表达获得重组目的蛋白,超声破碎后上清用镍柱亲和层析纯化。用镍柱法纯化的融合蛋白脱盐后,接着用Xa因子切割,得到了rPA蛋白。利用纤维蛋白平板法对纯化后表达产物的溶栓活性进行了检测。结果显示：经纯化后的目的蛋白可表现出明显的溶栓活性。本课题旨在用原核表达的方法筛选高表达rPA的基因工程菌株,为对其进一步的研究开发工作奠定了基础。