LncRNA FTX在非小细胞肺癌中的表达及其意义

来源 :桂林医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guangminghuayuan
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目的:目前肺癌是全世界死亡率最高的肿瘤,是影响人类健康的重要因素。其中非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的85%以上。尽管目前的诊疗技术不断提升,但是患者的5年生存率并不高。因此探求肺癌的发生机制对诊断和治疗提供理论基础具有重要意义。长链非编码RNA(lnc RNA)是一种长度超过200个核苷酸的非编码RNA,lncRNA FTX(long non-coding RNA five prime to Xist)在多种肿瘤中存在表达异常,并且对肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等细胞功能都有重要作用。本研究将探究lncRNA FTX在非小细胞肺癌组织及其癌旁组织的表达水平及差异,并进一步研究lncRNA FTX对NSCLC的增殖、侵袭、迁移、凋亡和细胞周期的调控作用以及对Wnt信号通路的影响。方法:1.收集广西壮族自治区南溪山医院及桂林医学院附属医院经病理学诊断为非小细胞肺癌的癌组织及其癌旁组织共30对,采用实时荧光定量PCR(q PCR)检测肺癌组织及癌旁组织中lncRNA FTX的表达差异。2.检测lncRNA FTX对NSCLC细胞功能的影响。构建lncRNA FTX的过表达载体(pc DNA-FTX)、干扰载体(sh RNA-FTX)和对照载体(pc DNA-NC、sh RNA-NC),转染NSCLC细胞A549和H838,并按照转染载体的不同分为pc DNA-FTX组、sh RNA-FTX组、pc DNA-NC组、sh RNA-NC组和空白对照组。并检测各组细胞的增殖、迁移、侵袭功能变化以及细胞周期和凋亡率的改变。3.探究lncRNA FTX是否影响Wnt信号通路的激活,使用Western Blot实验检测各组细胞中Wnt信号通路中关键蛋白Wnt3、Wnt5A、β-catenin和Cyclin D1的表达量。结果:1.NSCLC患者中,lncRNA FTX表达量在癌组织中显著低于癌旁组织(P<0.0001)。2.在细胞转染72小时后,CCK-8实验发现,与sh RNA-NC组相比,sh RNA-FTX组的OD值明显升高(P<0.05)。并且与pc DNA-NC组相比,pc DNA-FTX组的OD值明显降低(P<0.05)。pc DNA-NC组、sh RNA-NC组和空白对照组的OD值无统计学差异(P>0.05)。3.在克隆形成实验中,与sh RNA-NC组相比,sh RNA-FTX组克隆形成群落明显更多(P<0.001)。并且与pc DNA-NC组相比,pc DNA-FTX组克隆形成群落明显更少(P<0.001)。4.在Ed U增殖检测实验中,在A549和H838细胞中,与sh RNA-NC组相比,sh RNA-FTX组阳性细胞数目百分比明显更多(P<0.001)。并且与pc DNA-NC组相比,pc DNA-FTX组阳性细胞数目百分比明显更少(P<0.001)。pc DNA-NC组、sh RNA-NC组和空白对照组的阳性细胞数目百分比无统计学差异(P>0.05)。5.流式细胞术检测各组细胞凋亡率,与sh RNA-NC组相比,sh RNA-FTX组细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。与pc DNA-NC组相比,pc DNA-FTX组细胞凋亡率显著升高(P<0.0001)。pc DNA-NC组、sh RNA-NC组和空白对照组的细胞凋亡率无统计学差异(P>0.05)。6.流式细胞术检测各组细胞的周期改变,和pc DNA-NC组比较,pc DNA-FTX组的G0/G1期细胞比例增多(P<0.01),S期的细胞比例减少(P<0.001)。和sh RNA-NC组相比,sh RNA-FTX组的G0/G1期细胞比例减少(P<0.01),S期细胞比例增加(P<0.01)。7.在划痕48小时后检测各组细胞的划痕愈合率发现,pc DNA-FTX组划痕愈合率比pc DNA-NC组划痕愈合率明显更低(P<0.01),并且sh RNA-FTX组愈合率比sh RNA-NC组愈合率明显更高(P<0.01)。pc DNA-NC组、sh RNA-NC组和空白对照组细胞的划痕愈合率比较无统计学差异(P>0.05)。8.在Transwell实验中检测各组细胞的侵袭能力,pc DNA-FTX组比pc DNA-NC组细胞穿过小室的细胞数明显更少(P<0.001),并且sh RNA-FTX组比sh RNA-NC组穿过小室的细胞数明显更多(P<0.001)。pc DNA-NC组、sh RNA-NC组和空白对照组中穿过小室的细胞数无统计学差异(P>0.05)。9.Western Blot检测各组细胞中Wnt3、Wnt5A、β-catenin和Cyclin D1蛋白的表达水平。与pc DNA-NC组的细胞相比,pc DNA-FTX组中Wnt3、Wnt5A、β-catenin和Cyclin D1蛋白的表达量显著降低(P<0.05);与sh RNA-NC组相比,sh RNA-FTX组中Wnt3、Wnt5A、β-catenin和Cyclin D1蛋白的表达量显著升高(P<0.05)。pc DNA-NC组、sh RNA-NC组和空白对照组中Wnt3、Wnt5A、β-catenin和Cyclin D1蛋白的表达量无统计学差异(P>0.05)。结论:1.lncRNA FTX在非小细胞肺癌患者的癌组织与癌旁组织中表达存在差异,并且癌组织中lncRNA FTX表达量低于癌旁组织中lncRNA FTX表达。2.lncRNA FTX抑制NSCLC细胞A549和H838的增殖、迁移和侵袭,增强细胞凋亡,并调控细胞周期,使细胞发生G0/G1期阻滞。这可能与lncRNA FTX抑制NSCLC细胞中Wnt信号通路有关。
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