龙牙百合低温解除休眠期间蛋白质和核酸的变化

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本文以龙牙百合的试管鳞茎为材料,以同时期25℃常温贮藏为对照,用分光光度法研究了5℃低温贮藏过程中水溶性蛋白、总蛋白、DNA、RNA含量的动态变化;用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和IEF-SDS双向电泳方法分析了蛋白组分的变化,用PDQuest软件对双向电泳图谱进行蛋白表达差异分析,用MALDI-TOF-MS肽质量指纹谱分析方法鉴定了部分低温贮藏过程中特异表达或差异表达的蛋白。探讨了蛋白质含量和组分以及核酸含量变化与休眠解除的关系,为百合休眠的研究向分子水平的深入提供参考。主要实验结果如下: 水溶性蛋白和非水溶性蛋白的变化基本上呈相反的趋势。低温贮藏过程中,随着贮藏时间的推移,水溶性蛋白含量逐渐上升,贮藏前30d内缓慢上升,此后快速上升,60d时达到6.23mg/g.FW,是整个贮藏过程中水溶性蛋白含量最高的时期,比贮藏前提高了1.09mg/g.FW,上升幅度达21.4%,此后一直保持此水平;非水溶性蛋白在前40d内缓慢下降,40d时的含量为1.70mg,比贮藏前下降了0.6mg/g.FW,下降幅度达到26.1%,此后缓慢回升,但含量还是要低于贮藏前。常温贮藏过程中,蛋白质的变化和低温贮藏有相同的趋势,但无论水溶性蛋白、非水溶性蛋白的变化幅度都要比低温贮藏过程的变化小。水溶性蛋白的上升幅度为7.4%,非水溶性蛋白的下降幅度为15.2%。 百合试管鳞茎低分子量蛋白含量丰富,21kD和23kD两个蛋白组分表达优势明显,是其主要的蛋白组分。低温处理20d后,97kD处蛋白表达量下降,40d后,17kD处蛋白表达量明显提高。 检测到3类低温贮藏过程中变化的蛋白(多肽):Ⅰ.5个新多肽出现,分别为34kD/pI4.0、17kD/pI5.6、16kD/pI5.4、16kD/pI4.0和95kD/pI7.2。这些多肽一旦出现就不会随低温处理时间的推移(至少80d内)消失;Ⅱ.4个多肽表达丰度显著降低,分别为24kD/pI6.5、21kD/pI4.0、16kD/pI4.8和22kD/pI5.6;Ⅲ.11个多肽表达丰度显著升高,分别为15kD/pI4.6、15kD/pI5.0、16kD/pI4.0、17kD/pI4.8、17kD/pI5.8、35kD/pI3.8、35kD/pI4.6、38kD/pI6.4、48kD/pI6.7、66kD/pI6.4以及90kD/pI7.2。在常温贮藏过程中虽然有一些蛋白表达丰度有所差异,但没有检测到具有统计学显著差异的蛋白。 用单级质谱(MALDI-TOF-MS)方法鉴定了两个低温贮藏过程中差异表达的蛋
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