滑子菇多糖结构和生物活性的研究

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滑子菇(Pholiota nameko),又名珍珠菇,是一种可食用和药用的真菌。隶属无隔担子菌亚纲伞菌目、伞菌科、丝膜菌科。目前对滑子菇的研究主要侧重于滑子菇多糖的提取工艺和体内抗肿瘤作用,对滑子菇多糖的结构研究和在其他生物活性的研究方面报道甚少。本课题以滑子菇为原料,对滑子菇多糖的提取、分离纯化、结构鉴定和生物活性等方面进行研究,主要研究结果如下:滑子菇干品中的水分、灰分、粗脂肪、粗纤维、总糖、粗蛋白含量分别为:12.29%、6.38%、3.21%、5.06%、24.98%、57.12%,富含各类矿物质元素和氨基酸。考察超声辅助提取滑子菇多糖,用单因子筛选和响应面分析提取优化工艺中的最佳条件。单因素试验结果表明,最佳超声功率、最佳超声时间和最佳液料比分别是80W、15min和20:1,响应面分析法优化工艺得到修正最佳工艺条件为:超声功率97W、超声时间13.5和液料比20.5:1,得率达6.72%。最佳工艺提取滑子菇多糖,经脱色、醇沉、除蛋白得到滑子菇多糖PNP,PNP经过DEAE-52离子交换柱层分离后得到1种纯化多糖PNP,经凝胶渗透色谱和冻融分析法鉴定该多糖样品为单一成分,重均分子量为20199Da。对PNP进行理化性质分析,证明其不含淀粉,但含有较多的氨基己糖和糖醛酸,并且在多糖上缀合的氨基酸种类多,得出PNP是一种酸性的粘多糖。红外、GC分析显示,滑子菇多糖PNP含有3420~3400cm-1处的O-H伸缩振动、2930~2920cm-1处的C-H伸缩振动以及1430~1200cm-1处的一组羧基的伸缩振动,这些均是多糖的特征红外吸收;测定其单糖组成,表明D-甘露糖、D-葡萄糖和D-半乳糖,摩尔比为3.56:12.2:1,并且D-甘露糖和D-葡萄糖构成了主链的核心区域。经过高碘酸氧化分析得出不含有1→2、1→4型的糖苷键,Smith降解产物中不含有赤藓醇、丙三醇,只含有甘露糖、葡萄糖及半乳糖,证实无1→2、1→4型的糖苷键,甲基化分析再次验证该结论,且摩尔比1→:1→3:1→6为1.18:5.44:1。核磁共振分析表明PNP糖链中含α、β两种糖苷构型,含有氨基半乳糖,再次说明PNP是含蛋白质的多糖缀合物。刚果红实验显示PNP存在多股螺旋构象,β-消去反应验证了糖链与蛋白质之间存在O-糖肽键,碘-碘化钾实验证明多糖中存在侧链和分支。对抗氧化活性研究采用对DPPH·、O2-·和·OH自由基清除率以及还原能力的测定,结果显示PNP具有良好的清除自由基的能力,并且对·OH自由基的清除能力最好。选用豚鼠血清为补体的模型进行抗补体实验,验证了PNP具有较好的抗补体活性,并且随着PNP浓度的增大而增强。选用小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7、人体前列腺癌22Rv.1细胞和人肝癌Hep2B细胞的体外实验对PNP的免疫和抗肿瘤活性进行研究,结果表明PNP能促进巨噬细胞增殖、增强巨噬细胞吞噬能力,并刺激巨噬细胞分泌NO、H2O2及细胞因子IL-6,并且对这两种肿瘤细胞均具有较强的抑制,活性与浓度呈量效关系。
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