ASFV、SVDV、FMDV-O、PRV是猪病的4种重要病原。目前我国虽无ASF发生的报道,但是,由于邻国俄罗斯多次报道该病的发生和其可能带来的严重后果,能提早建立一种检测方法对预防该病非常必要,且能为将来研究该病提供一定的试验基础。SVD、FMD在临床表现上非常相似,很难从临床症状将它们区别开来,所以能建立一种快速、准确检测和鉴别这两种病的方法对将来的治疗和预后意义重大。另外,在本实验室的临床调查中,PR一直是近几年猪群当中的高发病,其恶劣的临床表现严重影响养猪业的发展,给畜牧养殖业带来了巨大的经济损失。本研究选定了4个靶基因片段,用pMD19-T克隆获得了T/ASFV、T/ FMDV-O、T/PRV、T/SVDV四个阳性重组质粒。在分析了ASFV、SVDV、FMDV-O、PRV致病因子基因的基础上,依据靶序列富集多重PCR(Tem-PCR)的原理,设计了4对特异性的套式PCR引物和探针,并在各内引物的5’端分别加上能被一对通用引物识别的标签序列。本试验建立了一种能同步检测4种常见病原的Tem-PCR方法。优化后的Tem-PCR方法Primer Mix的最佳浓度0.2μM,反应的最佳退火温度为50℃。实验结果表明：ASFV、FMDV-O、PRV这3种病原,使用该方法可以在1支反应管内快速、同步进行检测,得到大小分别为272bp (ASFV), 576bp (PRV) 233bp(FMDV-O)的特异性产物。Tem-PCR方法对3种病原基因组的检测灵敏度分别为：3.5×106 copies/μL (ASFV)、4.2×106copies/μL (FMDV-O)、4.6×103 copies/μL (PRV)。特异性试验发现该Tem-PCR方法从阳性重组质粒T/ASFV、T/FMDV-O、T/PRV基因组中均得到了大量的特异性扩增产物,其他基因组DNA无特异性条带出现。用优化的Tem-PCR方法扩增T/ASFV、T/FMDV-O、T/PRV、T/SVDV,并将产物用基因芯片技术检测,结果所有的杂交质控位点及检测样品均发出绿色荧光,所有的阴性质控位点均未发出荧光,表明杂交过程是有效可靠的。