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目的齿科合金作为口腔修复的常用材料,在口腔内行使功能时,会发生各种形式的腐蚀。细胞毒性一直是医用金属材料使用中的重要问题之一。随着分子生物学的迅速发展,生物材料生物相容性的研究手段逐渐多样化,其评价已从整体、细胞水平进入了分子水平。本研究应用MTT法和RT-PCR法比较了在细胞水平和分子水平上5种齿科合金浸提液对小鼠L929细胞的影响,为从分子水平上评价材料的生物相容性提供实验依据。材料与方法一、细胞培养L929细胞用含10%胎牛血清的RPMI 1640细胞培养基在37℃、5%CO2的培养箱中培养并传代。二、本实验室L929细胞生长代谢曲线将对数生长期的L929细胞按1～10×10~4个/ml制成10种不同浓度的细胞悬液,72小时后加入MTT液继续培养4小时后加入DMSO,在波长为490nm的条件下测其光密度值(OD值),计算各浓度组均值制图。三、MTT实验根据上述曲线确定接种细胞悬液的浓度。以5种金属浸提液及阴性对照培养L929细胞48小时后测其OD值,计算细胞增殖率P。四、RT-PCR实验将5种金属合金浸提液及阴性对照与L929细胞培养48小时,用RT-PCR方法检测细胞caspase-3、caspase-8和caspase-9的mRNA表达。结果一、细胞生长曲线结果当接种细胞量＜4000个/孔时各组的差异不明显。当细胞量≥7000个/孔时,OD值随着接种细胞量的增加反而降低。最佳细胞状态为5000-7000个/孔。二、MTT实验评价细胞毒性5种合金浸提液在MTT比色法结果中,培养48h后除铜浸提液组的细胞毒性为4级外,其它各浸提液组均为0级。三、5种合金浸提液对L929细胞caspase-3、caspase-8和caspase-9mRNA表达的影响5种合金浸提液及阴性对照培养的L929细胞的caspase-8mRNA无明显差异caspase-3和caspase-9mRNA差异显著,由低到高依次为铜合金组＜阴性对照组＜金合金组＜钴铬合金组＜银钯合金组＜镍铬合金组。结论1、在分子水平上研究生物材料对L929细胞的影响较在细胞水平上更灵敏。2、5种齿科合金中的金属离子都会不同程度地诱导细胞凋亡,且其凋亡途径为线粒体途径。3、L929细胞经5种齿科合金浸提液培养48h后的caspase-3和caspase-9mRNA水平由低到高依次为:铜合金＜阴性对照和金合金＜钴铬合金＜银钯合金＜镍铬合金。