肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7多价基因工程疫苗的实验研究

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O157:H7 大肠杆菌是肠出血性大肠杆菌(EHEC)的一个主要血清型,感染该菌可使人患腹泻、出血性结肠炎(hemorrhagic colitis,HC),也可引发溶血性尿毒综合征(hemolytic uremic syndrome , HUS) 及血栓形成性血小板减少性紫癜(thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP)等严重并发症,严重者可导致死亡。EHEC O157 的感染因具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性和抗生素治疗可加剧病情的危险性等特点,已经成为全球性的公共卫生问题。目前EHEC O157:H7 的全基因组测序已经完成,然而目前对其感染仍缺乏有效的防治方法,研究证明抗菌药物可促使菌体破坏,释放志贺毒素增加,从而使并发HUS 的危险性增加。因此,寻找有效的针对性防治方法如疫苗对防治O157:H7 的感染有着极其重大的意义。人类同病原微生物长期斗争的历史表明,疫苗是预防和抑制传染病的有力武器。由于O157 的暴发流行和治疗上的困难,疫苗研究就显得尤其紧迫。为了评估疫苗的保护效果,建立一个与人类病变相似的动物模型极为重要。对于O157 菌,其易感动物为牛、羊、猪等大型哺乳动物,不适合实验室应用;而小型实验动物如大鼠、小鼠等都不是O157 菌的天然易感动物,须降低其对O157 的抵抗力或增强O157 对其的致病力,才有可能建立相应的动物模型。目前已公认的与EHEC 致病性有关的致病基因主要有eae 基因、stx 基因、溶血素hly 基因还有III 型分泌蛋白EspA、B、D 等。紧密粘附素(Intimin)介导细菌与肠上皮细胞的紧密粘附,是O157 最主要的定植因子,尤其是它的约C 端1/3 部分(Intimin-C)为胞外功能区,与相应受体结合,且具有良好的免疫原性和免疫保护性,是理想的疫苗备选抗原之一。EHEC O157可以产生两种志贺毒素,志贺毒素Ⅰ(Stx1)和志贺毒素Ⅱ(Stx2)。其中Stx2为分泌型表达,由1个A亚单位和5个B亚单位组成,A亚单位具有细胞内毒性,能与28S rRNA作用从而抑制蛋白质合成,是大肠杆菌O157:H7引起临床表现的病理基础;B亚单位具有细胞结合特性,能与具有特定受体(Gb3)的细胞结合,从而引导A亚单位发挥作用。多数O157:H7细菌产生Stx2,与溶血性尿毒综合征(HUS)及血栓形
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