本文对纳豆激酶分离纯化以及酶学性质两方面进行了系统研究，以实验室保存的高产纳豆枯草芽孢杆菌 ZN4为原料，发酵、离心除菌体得最初酶液。纯化过程用纤维蛋白平板法测定NK酶活，确立两种纳豆激酶的分离纯化工艺，(一)离心去除菌体，硫酸铵分级沉淀和阴阳离子交换层析和Phenyl Sepharose疏水柱层析；(二)离心去除菌体，硫酸铵分级沉淀和亲和层析。最后均得到电泳纯的酶。 通过盐析曲线，确定30％饱和度硫酸铵盐析去除杂蛋白，65％饱和度硫酸铵盐析得到粗酶样品。结果表明盐析后可去除88.2％的杂蛋白，NK活力损失仅为14％，比活力为67785 IU/mg。回收率为86.0％，纯化倍数为6.8。 盐析后的粗酶液单独过阴离子、阳离子和疏水层析柱，都得不到电泳纯的酶。将粗酶液依次经过阴离子交换柱、阳离子交换柱、疏水层析柱，分离纯化的纳豆激酶最终纯化倍数达到32.2，回收率为13.2％。 盐析后的粗酶液经亲和层析，只需一次过柱，就可得电泳纯的酶，分离纯化的纳豆激酶纯化倍数达到8.3，回收率为43.9％。与传统方法相比，该方法成本低、耗时短、效率高，已申报国家发明专利，申请号为200710027907.7。 纳豆激酶最适反应温度范围为45℃～55℃，其中在50℃时酶活最高。对于热稳定性，在温度低于37℃时，纳豆激酶活力稳定性好，而高于45℃以后稳定性较差。纳豆激酶的最适pH范围为pH7.0～pH9.0，与文献报道基本一致。