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气单胞菌（Aeromonas）是革兰氏阴性菌,广泛存在于土壤、淡水、海水等环境中,是人、兽以及水产动物共患条件致病菌,可造成我国大量淡水鱼巨大的经济损失。本研究主要调查2009-2018年分离的173株鱼源气单胞菌的毒力基因、分型与其致病力的相关性;并选取不同时间分离的、不同患病动物来源的、不同毒力基因型和不同致病力的5株维氏气单胞菌菌株,测定其主要生物学特性;探究维氏气单胞菌外膜蛋白ompAⅡ基因的分布情况、OmpAⅡ的抗原性及其对异育银鲫的免疫效果。主要内容如下:1、鱼源气单胞菌的毒力基因检测、分型及致病力以2009-2018年从不同患病鱼分离的173株气单胞菌为研究对象,通过检测10种毒力相关基因、测定溶血活性、腹腔注射感染异育银鲫等方法开展评价。管家基因gyrB分子鉴定结果显示,173株气单胞菌中维氏气单胞菌（A.veronii）（119/173,68.8%）和嗜水气单胞菌（A.hydrophila）（50/173,28.9%）是主要流行的菌株。aer（162/173,93.64%）、act（131/173,75.72%）、lip（152/173,87.86%）、exu（154/173,89.02%）、fla（143/173,82.66%）和gca T（148/173,85.55%）6个毒力基因普遍存在气单胞菌中。依据检测到的毒力基因数量从多到少分布情况,这些菌株可分为7大类（Ⅰ～Ⅶ）53个毒力基因型。大部分嗜水气单胞菌菌株检测到8-10个毒力基因,主要分布于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ类基因型;维氏气单胞菌菌株的eprCAI、ahyB、ast和alt四个毒力基因检测率低,主要分布于Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ类基因型。大部分气单胞菌菌株（94.22%,163/173）具有溶血活性。代表性毒力基因型的38株维氏气单胞菌和20株嗜水气单胞菌腹腔注射攻毒结果显示,3.0×106CFU/尾的剂量下,3株维氏气单胞菌使鲫死亡率达80%～100%,16株嗜水气单胞菌使鲫死亡率达90%～100%。结果表明,维氏气单胞菌是目前最主要流行的气单胞菌,其检测到的毒力基因普遍少于嗜水气单胞菌菌株,且对异育银鲫的致病力普遍弱于嗜水气单胞菌菌株。2、维氏气单胞菌生物学特性及药物敏感性选取不同时间分离的、不同患病动物来源的、不同毒力基因型和不同致病力的5株维氏气单胞菌菌株（GZ09007、YC170511、XZ180501、Ci13643、FS12001）和1株ATCC来源的维氏气单胞菌ATCC35624,评价了不同培养条件（温度、盐度和pH）对GZ09007菌株生长的影响;测定了6株维氏气单胞菌菌株的胞外产物活性、外膜蛋白抗原性以及其药物敏感性。结果显示:GZ09007菌株的最适生长温度为24～40℃,盐度为5‰,pH为7.0。6株维氏气单胞菌菌株均具有溶血活性、蛋白酶活性及脂肪酶活性,且均携带aer、act、lip、exu等毒力基因。外膜蛋白SDS-PAGE图谱表明,6株维氏气单胞菌菌株的外膜蛋白（Omps）呈多态性分布,大约36kDa左右的条带均能被GZ09007的Omps兔抗血清识别。药物敏感试验显示,6株维氏气单胞菌菌株对同一种药物的敏感性一致,复方新诺明（复方磺胺甲基异恶唑）、氟苯尼考及恩诺沙星可用于治疗该菌引起的细菌性败血症。3、维氏气单胞菌GZ09007株OmpAⅡ的重组表达及抗原性为探究维氏气单胞菌中外膜蛋白ompAⅡ基因的分布情况及OmpAⅡ的抗原性,通过ompAⅡ基因检测、OmpAⅡ的重组表达、外膜蛋白免疫印迹等方法开展研究。结果显示:ompAⅡ基因广泛存在于维氏气单胞菌中（33/39,84.61%）。维氏气单胞菌GZ09007的ompAⅡ基因开放阅读框为999bp,编码332 aa,蛋白分子量大小为36k Da,等电点（p I）为4.91。菌株GZ09007的兔抗血清、GZ09007rOmpAⅡ、外膜蛋白Omps及全菌的兔抗血清均能够识别rOmpAⅡ。rOmpAⅡ的兔抗血清能够识别维氏气单胞菌约36k Da的外膜蛋白Omps;结果表明,OmpAⅡ具有良好的抗原性。4、维氏气单胞菌GZ09007株OmpAⅡ的免疫效果为评价rOmpAⅡ在鱼体的免疫效果,通过免疫异育银鲫、测定血清抗体效价、血清SOD酶活性、LZM活性以及不同气单胞菌菌株攻毒等方法开展评价。结果显示:腹腔注射rOmpAⅡ-ISA763A免疫异育银鲫可以产生显著的免疫应答,血清抗体效价第7 d、14 d、21 d、28 d、42 d和56 d分别达到1:100、1:800、1:1600、1:800、1:800和1:800。免疫组第42d、56d的SOD活性显著增强;第7 d、14 d、21 d、28 d、42 d和56 d的LZM活性与对照组差异极显著。免疫28 d后,腹腔注射维氏气单胞菌（GZ09007、YC170511和XZ180501）和嗜水气单胞菌（Hn099）进行人工感染,免疫组的相对保护率（RPS）分别为100%、100%、38%和89%。结果表明,rOmpAⅡ-ISA763A具有良好的免疫效果,能提高异育银鲫抵抗维氏气单胞菌和嗜水气单胞菌感染能力,可作为气单胞菌基因工程亚单位疫苗进一步研究开发。