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背景:恶性肿瘤是导致人类死亡的主要疾病,在许多国家位列居民死因的第一或第二位,这是由于目前仍然缺乏针对肿瘤的早期特异性诊断、转移预警、疗效预测及有效治疗的临床方法。分子影像学能够在解剖形态基础上更为深入地揭示组织的生物特点,尽早研究出分子在早期是如何变异及在病理方面如何改变的,既无创又可重复得为人们提供组织定量、定时、可视化的分子基因信息,因此可望实现肿瘤基因水平的特异性诊断。在活体影像学研究中,高特异性和亲和力的分子探针是分子成像的重要前提。借鉴分子生物学中的反义基因技术,本课题组以超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide,SPIO)标记的 c-erbB2癌基因反义寡脱氧核苷酸(anti-senseoligodeoxynucleotides,ASODN)探针为基础,即磁性c-erbB-2反义探针,将该探针用于体外转染高表达c-erbB2癌基因的SK-Br3肿瘤细胞株,初步发现其同时具有诊断与治疗的功能。 目的:探讨不同浓度磁性c-erbB-2反义探针转染乳腺癌SK-Br3细胞株后,在不同时间点对其形态及表达的影响,得出反义探针转染SK-Br3细胞的有效浓度及最佳时间数据。 方法:一方面将反义探针含铁质量浓度分别定为5、10、25、50及100 mg/L,转染乳腺癌SK-Br3细胞24 h;另一方面选择磁性c-erbB-2反义探针的含铁终浓度为25μg/mL,分别孵育SK-Br3细胞6h、12h、24h、36h及48h。采用普鲁士蓝染色并在光学显微镜及透射电镜下直接观察细胞铁颗粒,用原子吸收光谱法测定细胞内铁含量,检测不同浓度的反义探针在不同孵育时间下对SK-Br3细胞的转染效率。采用台盼蓝排除实验、CCK-8试剂盒观察细胞活性,Western blot实验检测蛋白质表达、RT-PCR实验检查mRNA表达,来检测不同浓度的反义探针在不同孵育时间下转染后的SK-Br3细胞生物特性。运用MR对不同浓度的反义探针在不同孵育时间下转染的SK-Br3细胞进行成像,研究信号强度的变化。 结果:SK-Br3细胞对反义探针在一定质量浓度范围内(5 mg/L、10 mg/L、25 mg/L)及时间范围内(6h、12h、24h)呈依赖式摄取。当探针质量浓度为25 mg/L,孵育时间为24h时细胞内铁含量为(18.38±0.28) pg,细胞活力、存活率、细胞内c-erbB-2蛋白及mRNA表达量明显降低(P<0.05),磁共振扫描图像(MRI)显示该组细胞T2*值出现明显的降低(P<0.05)。50 mg/L及100 mg/L组各项结果与25mg/L组比较差异无统计学意义(P>0.05);36h及48th组各项观察结果与24h组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。 结论:当磁性c-erbB-2反义探针质量浓度为25 mg/L,细胞孵育时间为24h时,可以有效转染及特异性抑制SK-Br3细胞株的表达,并被MRI所检测。