【摘 要】
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背景和目的:革兰氏阴性杆菌细胞壁的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)是内毒素的主要成份,也是形成脓毒症相关性肺纤维化的重要致病因素。肺成纤维细胞的异常聚集和活化是肺纤
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背景和目的:革兰氏阴性杆菌细胞壁的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)是内毒素的主要成份,也是形成脓毒症相关性肺纤维化的重要致病因素。肺成纤维细胞的异常聚集和活化是肺纤维化形成的重要过程,但其具体机制未明。本研究采用LPS刺激肺成纤维细胞作为体外研究脓毒症相关性肺纤维化模型,深入探究LPS与肺成纤维细胞增殖的相互关系并明确叉头框蛋白O3a(Forkhead Box O3a,FoxO3a)和细胞周期调控负因子p27(FoxO3a/p27信号通路)在该过程中的作用,由此进一步丰富和完善LPS致肺纤维化的发病机理,为探索脓毒症相关性肺纤维化的防治手段奠定基础。方法:体外原代培养小鼠肺成纤维细胞,通过CCK8细胞增殖实验检测LPS刺激肺成纤维细胞后细胞的增殖情况;以Western Blot技术和免疫荧光技术检测LPS作用于小鼠肺成纤维细胞后细胞周期调控负因子p27蛋白的表达情况;通过胞浆胞核分离技术分别检测胞核FoxO3a和胞浆磷酸化的FoxO3a(p-FoxO3a)的表达情况;通过慢病毒转染使细胞过表达FoxO3a或者通过吉非替尼活化FoxO3a后,以Western Blot技术检测LPS作用于小鼠肺成纤维细胞后细胞周期调控负因子p27蛋白的表达情况;通过CCK-8细胞增殖实验检测LPS刺激小鼠肺成纤维细胞后细胞增殖的变化情况以明确FoxO3a/p27通路在LPS诱导小鼠肺成纤维细胞增殖过程中的作用。结果:LPS刺激肺成纤维细胞后能使胞核内的FoxO3a磷酸化失活,p27蛋白下调,最终引起肺成纤维细胞异常增殖;过表达FoxO3a或者用吉非替尼预处理以活化FoxO3a后可逆转LPS介导的p27下调作用和肺成纤维细胞增殖过程。结论:FoxO3a/p27信号通路失活介导了LPS诱导的肺成纤维细胞异常增殖过程。吉非替尼可通过活化FoxO3a抑制LPS诱导的肺成纤维细胞异常增殖,从而可能在脓毒症相关性肺纤维化过程中发挥保护作用。
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