腺疫(Strangles)是由马链球菌马亚种(Streptococcus equi subspecies equi,S.equi)感染马、驴、骡等马属动物引起的急性接触性传染病。腺疫是我国三类动物疫病,在我国尚没有详细的疫情报道,本课题组对马、驴腺疫的发病情况进行了调查,发现随着我国马、驴产业发展、马属动物流通的增加,腺疫发病率逐年升高,已成为危害马、驴养殖业的主要传染病之一。由于研究起步晚和缺乏应有的重视,目前尚缺乏预防和治疗腺疫的有效手段。国内外腺疫疫苗的研究结果显示,尚没有有效的疫苗能提供持久的保护力,免疫保护期均不超过6个月,且存在疫苗免疫的安全性问题。对腺疫的治疗方面仍以使用抗生素为主,这不可避免的将产生耐药菌增多、动物免疫机能降低等问题。为了研发腺疫的疫苗和治疗制品,本研究通过鉴定获得一株生物学特征明确的S.equi(HLJ2018),利用该菌株初步建立了小鼠和马的感染模型,并筛选到了1株该菌株的噬菌体(SP2019),该噬菌体为上世纪八十年代以来世界上首次报道的S.equi噬菌体。具体工作如下:马链球菌马亚种临床分离株生物学特性研究及感染模型的建立:本试验从黑龙江某马场分离腺疫病原菌,对该菌进行了革兰氏染色镜检形态观察、生化鉴定、se M蛋白基因测序鉴定、16S rRNA测序鉴定、耐药性分析、对小鼠的致病力及其脏器的影响,同时建立了有效的马感染模型,确定了该菌株感染马的方式及感染剂量。结果表明,该病原菌为S.equi菌株,命名为HLJ2018;HLJ2018对头孢曲松、红霉素、替考拉宁、苯唑西林、利福平比较敏感,而对多西环素、阿莫西林、克林霉素耐药;不同剂量HLJ2018通过腹腔注射的方式感染小鼠,发现该菌株对小鼠的最小完全致死剂量为1×105CFU,小鼠解剖后,各脏器经HE染色,发现HLJ2018主要在脾脏增殖,导致脾脏结构消失,对心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脑等部位影响较小;以50×1011CFU/匹的剂量通过喂服的方式感染试验马,能够达到100%的发病率,与对照组相比,试验马出现典型腺疫症状,即下颌部肿胀、化脓破溃。S.equi噬菌体的生物学特性研究及其用于腺疫治疗:以HLJ2018为宿主菌,经过对数千份环境样品的筛选,成功分离到马链球菌马亚种噬菌体,命名为SP2019。对该噬菌体进行了电镜形态观察、最佳感染复数测定、宿主菌裂解谱以及噬菌体治疗效果的初步研究。结果表明,SP2019属于短尾噬菌体科,最佳感染复数为0.01;不耐高温;对酸碱比较敏感;有较强的裂解能力,能裂解不同地区分离到的马链球菌马亚种;腹腔注射SP2019治疗受感染的小鼠,不能提高小鼠存活率;通过给患马静脉注射SP2019悬液,与对照组比较,能够明显促进下颌肿胀消退。本试验完成了对S.equi菌株HLJ2018的生物学特征研究,利用该菌株制备的菌悬液感染小鼠和马匹,初步建立了马链球菌马亚种感染模型,为腺疫的疫苗、治疗等研究奠定了基础。同时分离到针对HLJ2018的噬菌体SP2019,这是自1977年美国分离到1株马链球菌马亚种噬菌体后,近四十年唯一报道的S.equi噬菌体。完成了其基本生物学特性研究,用该噬菌体治疗患腺疫马匹,初见成效。噬菌体SP2019的发现,不仅开拓了腺疫治疗的新方向,也为研究马链球菌马亚种进化、宿主特异性等提供了重要工具。本项研究对腺疫的疫苗、治疗等研究具有重要的意义。