目的:分选连接蛋白16（Sorting Nexin 16,SNX16）主要分布于细胞内体中,是内体的重要组成部分。作为分选连接蛋白家族的一员,SNX16在调控细胞内蛋白转运的过程中能够发挥重要作用。脓毒症是指由病原微生物感染导致机体免疫反应失调引起的全身性炎症反应综合征,病情凶险,死亡率高,严重威胁人类的身体健康。Toll样受体4（Toll like receptor4,TLR4）及其信号通路在脓毒症发生发展过程中起着重要作用,我们实验室的前期结果表明,SNX16参与LPS介导的机体炎症反应,但其在TLR4信号通路传导中的作用尚不清楚。本研究旨在探究SNX16在巨噬细胞特异性敲除对TLR4及其信号通路的影响及其分子机制。方法:1.通过SNX16flox/flox小鼠,与Lyz2-Cre（髓系特异性表达Cre）小鼠交配得到巨噬细胞特异性敲除SNX16小鼠,再将SNX16 CKO小鼠与Gt（ROSA）26Sortm 4（ACTB-tdTomato,-EGFP）Luo/J小鼠杂交得到含mTmG双报告基因的巨噬细胞特异性敲除SNX16的实验组小鼠。2.通过盲肠结扎穿刺制备小鼠脓毒症模型,实验分为对照组与SNX16敲除组两组,观察小鼠死亡曲线。3.采用流式细胞术检测LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞表面标志物（F4/80,CD86）分布情况。4.检测LPS介导的相关信号通路。提取小鼠腹腔巨噬细胞,给予LPS刺激,使用Western Blot检测TLR4、TNF-α、SNX16、IL-6蛋白表达含量以及IRF3、NFκB、IκBα、P38、ERK、JNK、AKT等相关蛋白磷酸化水平。5.SNX16缺失对LPS介导的细胞膜TLR4内化的影响。流式细胞术检测巨噬细胞表面TLR4表达水平。6.SNX16缺失对LPS刺激后巨噬细胞中TLR4的动态分布的影响。通过细胞免疫荧光观察巨噬细胞中SNX16与TLR4的共定位关系以及TLR4在内体中的定位情况。结果:1.特异性敲除巨噬细胞中SNX16明显减慢盲肠结扎穿刺造成的脓毒症小鼠死亡速率,这表明巨噬细胞敲除SNX16对脓毒症具有一定的保护作用。2.SNX16缺失对LPS介导的M1型表面标志物CD86的表达没有明显影响。3.SNX16缺失明显抑制LPS诱导的巨噬细胞中IRF3、P38、JNK、AKT的磷酸化。4.SNX16缺失促进LPS介导的巨噬细胞TLR4内化,明显减少胞内TLR4蛋白表达含量。5.LPS处理后,小鼠腹腔巨噬细胞中SNX16与TLR4存在共定位;SNX16缺失促进TLR4向晚期内体的转运,同时抑制TLR4在细胞内的循环转运。结论:我们的结果表明,巨噬细胞缺失SNX16明显降低盲肠结扎穿刺造成的脓毒症小鼠死亡率。巨噬细胞特异性敲除SNX16对其细胞表面M1型标志物CD86的表达没有明显影响。缺失SNX16影响巨噬细胞中TLR4的分布、转运和降解;通过促进TLR4内化转运至晚期内体,进入溶酶体降解,减少TLR4的循环利用,抑制TRIF依赖的信号传导,降低TNF-α、IL-6等促炎细胞因子的分泌从而减轻炎症反应。