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全球恶性肿瘤发病率在今后20年间将增加50%,而在我国,恶性肿瘤已成为威胁国人生命的最大疾病。因此,克服肿瘤是亟待解决的问题。治疗肿瘤药物种类众多,寻找抑制肿瘤生长、转移和复发的特异性药物成为药物研究的一个热点。中草药是从植物中提取出来的,与传统化疗药物相比,其副作用少,安全性高,逐步成为化疗药物研究的热点。在植物类抗肿瘤药物中,许多中药如紫杉醇类药物、喜树碱类药物都取得了很好的结果。以中药有效成分为先导化合物,经化学结构修饰,得到疗效好,毒副作用小的新型抗肿瘤药物,是当今抗肿瘤药物研究的一个重要方向。中草药小檗胺及其衍生物EBB显示出较强的抗肿瘤活性。小檗胺是小檗属植物中提取的双苄异喹啉类生物碱,是一种天然钙调素拮抗剂,具有抗肿瘤、促进白细胞增生等作用。其衍生物[O-（4-乙氧基）-丁基]-小檗胺（O-4-Ethoxyl-Butyl-Berbamine,EBB）是国内外已知最强的钙调素拮抗剂之一,具有与小檗胺相似的药理作用,但其拮抗钙调素的能力是小檗胺的一百多倍。先前的研究表明,EBB在体外抑制多种肿瘤细胞增殖、耐药逆转及实体瘤细胞转移;在体内,还具有抗小鼠肝癌作用。本次研究的目的在于探讨EBB对人乳腺癌细胞的药物作用,探讨其抗肿瘤作用机制。采用四唑盐（MTT）比色法在体外评价不同浓度EBB对乳腺癌细胞的生长抑制作用;用Annexin V-FITC/PI双染色法和流式细胞术检测低于IC30EBB对细胞凋亡的影响;并用流式细胞术检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平的改变;在激光共聚焦显微镜下观察EBB作用后肿瘤细胞内线粒体、内质网分布及细胞内游离Ca2+水平变化;同时采用RT-PCR法检测EBB对细胞内凋亡相关基因survivin mRNA表达水平的影响。结果表明MCF-7细胞EBB的IC50值为10.53μmol/L,并且此抑制作用可被超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）所减弱;EBB能诱导MCF-7细胞凋亡;EBB作用能使MCF-7细胞内的ROS呈剂量依赖性升高,并在作用2小时左右达到峰值;EBB能够明显增加细胞内钙离子浓度,并下调凋亡抑制蛋白survivin的基因表达;在激光共聚焦显微镜下可见,EBB作用后线粒体呈药物剂量依赖性减少、破坏,而内质网则出现药物剂量依赖性肿胀。因此我们得出结论,EBB对人乳腺癌MCF-7细胞具有明显抗肿瘤作用,作用机制可能通过氧化应激反应来诱导肿瘤细胞凋亡。Survivin基因是凋亡抑制蛋白家族（IAP）中分子量最小的成员,是一种肿瘤特异性凋亡抑制因子,主要分布于胚胎和肿瘤组织,正常分化成熟组织几乎检测不到。研究表明,survivin与许多肿瘤的复发和预后密切相关,其主要通过抑制caspase蛋白酶活性而抑制细胞凋亡。本实验采用PCR法扩增survivin序列,经酶切、连接,克隆至表达载体pAYZ,转化E.coli 16C9,经测序鉴定阳性克隆菌落插入片段为正确编码的survivin基因序列。经低磷培养基AP5诱导表达,用His-tag亲和层析柱纯化,为进一步研究其生物学特性,靶向survivin治疗恶性肿瘤奠定基础。