慢性乙肝患者肝脏中Tim-3、PD-1和CD28信号通路对iNKT细胞功能的影响

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目的研究慢性HBV感染患者肝脏中恒定自然杀伤T (invariantnature killer T,iNKT)细胞的功能与其表面Tim3、PD1、CD28表达的关系。方法建立α-半乳糖神经酰胺(α-GalCer)诱导慢性HBV感染后iNKT细胞体外诱导扩增模式,以流式细胞术检测体外培养基线水平0d和72h的iNKT细胞的表面Tim3、PD1、CD28的表达以及IL-4、IFN-γ的分泌情况;用ELISA法检测培养上清中IL-4、IFN-γ的水平;阻断PD-L1、Tim-3及活化CD28/CD80信号通路之后,以流式细胞法和ELISA法检测IL-4+iNKT与IFN-γ+iNKT。结果慢乙肝患者(实验组)肝脏中的iNKT细胞的频率明显低于正常人(对照组)(P<0.05);慢乙肝患者肝脏iNKT细胞表面的Tim3、PD1的表达明显增多(P<0.05),而CD28的表达则明显减少(P<0.05);iNKT细胞分泌的IL-4、IFN-γ的频率明显降低(P<0.05);单纯以α-GalCer刺激培养72小时后,实验组IL-4+iNKT、IFN-γ+iNKT的频率没有明显变化(P>0.05),而阻断PD/PD-L1、Tim-3/Tim-3L和(或)活化CD28/CD80信号通路后,IL-4+iNKT、IFN-γ+iNKT细胞的频率明显提高(P<0.05)。结论慢性乙肝患者肝脏iNKT细胞功能存在明显的缺陷,并提示负性调节因子Tim3、PD1表达的增加和共刺激调节因子CD28表达的降低可能与iNKT细胞功能的下调密切相关。
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