论文部分内容阅读
Foxl2（winged helix／forkhead transcriptionfactor gene 2）是新近发现的一种在眼睑、成体卵巢颗粒细胞中特异性表达的转录因子，是翼状螺旋／叉头状转录因子超家族（winged helix／forkheadtranscription factor，FOX）成员。在人和哺乳动物早期发育过程中，Foxl2通过转录调控作用对雌性性腺分化，特别是对颗粒细胞增殖、卵巢发育和功能的维持起重要作用。为阐明Foxl2在南方鲇性别决定和分化过程中的作用，本实验通过RT-PCR和RACE相结合的方法从南方鲇卵巢中克隆了Foxl2全长cDNA序列（GenBank Accession No．EF015396）。南方鲇Foxl2 cDNA全长为1455bp，包括5′端228bp的非编码区，900bp的蛋白质编码区和3′端327bp非编码区。开放阅读框编码299个氨基酸，包括105个氨基酸组成的DNA结合域（即FH结构域，FH-domain）。将南方鲇Foxl2序列与所有已克隆的脊椎动物Foxl2进行同源性比较，并构建进化树，结果显示脊椎动物Foxl2的FH结构域保守性最高。除此之外，C-末端比N-末端更为保守。同时，我们发现南方鲇Foxl2同其它非哺乳类脊椎动物一样，缺少含14个丙氨酸组成的聚丙氨酸区和甘氨酸-脯氨酸重复区。另外，我们对南方鲇Foxl2在南方鲇各组织中的表达模式进行了研究。发现南方鲇Foxl2在脑、垂体、鳃和性腺表达，且在性腺的表达具有明显的性别二态性，卵巢表达量要高于精巢。说明“脑-垂体-性腺”轴，特别是卵巢可能是Foxl2主要的靶组织。雌二醇E2、芳香化酶抑制剂fadrozole（F）、雌激素受体拮抗剂tamoxifen（TAM）和fadrozol+tamoxifen（F+TAM）用酒精溶解并分别与饵料混匀，对孵化后5天（day after hatching，dah）的南方鲇全雌幼鱼进行投喂处理20天，65dah时分离南方鲇脑和性腺，用半定量RT-PCR测定了Foxl2、卵巢型芳化酶Cyp19a和脑型芳化酶Cyp19b表达水平变化情况。结果表明，与对照组相比较，在F、TAM和F+TAM处理组性腺中Foxl2和Cyp19a表达下调，而Cyp19b在性腺表达没有明显变化。同时在F、TAM和F+TAM处理组脑中Foxl2和Cyp19b表达也出现下调。相反E2处理组性腺Foxl2和Cyp19a表达上调，而脑中Foxl2和Cyp19b表达上调。120dah组织学观察表明，在F、TAM和F+TAM处理组中均出现了不同程度的性逆转，与对照组相比，性腺发生了显著差异：卵巢壁增厚，卵巢腔减小。F组出现卵母细胞减少，滤泡细胞退化，体细胞数量增加；TAM组出现了许多滤泡细胞退化后遗留下来的空腔，且卵母细胞延长变形；在F+TAM组出现了类似精小囊状结构，精原细胞和初级精母细胞；E2组与对照组基本一致。同时在F、TAM和F+TAM处理组分别得到50％、76％和80％性逆转雄鱼，说明了Foxl2、Cyp19a和Cyp19b在脑和／或性腺不同的层次上对南方鲇性别决定和分化起重要作用。