春兰(Cymbidium goeringii)组培快繁及其试管开花影响因素研究

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春兰(Cymbidium goeringii Rchb.f.)在我国及其它东南亚地区有着浓厚的历史文化底蕴,其多样的瓣型和典雅的花色深受人们的喜爱而被广泛栽培,但在拓展兰花产业和推广新品种的过程中,需要经过授粉、结果、开花到筛选优良新品种至少10年的育种周期,导致相比其它草本花卉成本更高,如何缩短育种周期提前获取优良花型性状和降低培育成本成为亟需解决的问题。组织培养作为一种快速繁殖技术能够有效解决上述问题,因此本研究以春兰杂交F1根状茎和试管苗为材料,通过组织培养和激素测定围绕其再生体系、试管开花以及内源激素与其之间的相关性进行研究,以期缩短其营养生长到生殖生长转变的时间,为春兰杂交后代选育优良新品种摆脱季节及生长周期对开花的限制,同时探讨春兰花芽诱导过程中分化的规律,为国兰杂交新品种试管开花体系提供理论支撑。主要结果如下:1.春兰杂交F1植株再生中,增殖最适培养基为3.0 g·L-1花宝2号+0.5 mg·L-1 6-BA+3.0 mg·L-1 NAA+1.0 g·L-1 蛋白胨+1.0 g·L-1 活性炭(AC)+30.0 g·L-1 白砂糖(Su)+7.0 g·L-1 琼脂(Ag),生长速度和增殖系数分别为7.31和6.02;分化最适培养基为2.0 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1 NAA+30.0 g·L-1 Su+7.0 g·L-1 Ag,分化率、芽诱导个数和株高分别为90%、5.44个和2.53 cm;生根最适培养基为1.5 mg·L-1 IBA+2.0 g·L-1 蛋白胨+50.0 g·L-1 香蕉+60.0 g·L-1 土豆+1.0 g L-1 AC+25.0 g·L-1 Su+7.0 g·L-1 Ag,生根率、生根数和平均根长分别为100%、8.03条和3.00 cm/条根;春兰组培苗练苗移栽60 d后存活率达 96.53%。2.春兰根状茎试管开花中,细胞分裂素6-BA和TDZ是花芽诱导的主要因素;6-BA相对TDZ更适合春兰试管开花,最适浓度为8.0 mg·L-1,TDZ花芽诱导率高但花芽多畸形;低浓度生长素NAA有利于花芽分化后花朵的开放,以0.1 mg·L-1为宜;MS中2~3倍P比1倍P显著提高了花芽诱导率;Su为35.0 g·L-1时最适合根状茎花芽分化,过高反而抑制成花。春兰组培苗试管开花最适培养基为1.5 mg·L-1 IBA+3.0 g·L-1 蛋白胨+50.0 g·L-1 香蕉+60.0 g·L-1 土豆+1.0 g·L-1 AC+30.0 g·L-1 Su+7.0 g·L-1 Ag,花芽诱导率为20.00%,均能正常开放。3.温差和光周期对春兰根状茎试管开花影响很小,为非决定性因素;春兰根状茎试管开花最适合的光强为700~800 1x,花芽诱导率、正常花芽率分别为19.08%、10.24%;光强、光质和光周期正交设计组合下最适合春兰根状茎试管开花的培养环境为100 μmol·m-2·s-1光强+1R:1B:0.01G光量+14/10h·d-1日夜光照,花芽诱导率、正常花芽率和叶芽诱导率分别为23.43%、11.88%和50.35%;红光的递增抑制了花芽的分化;LED补光系统的花芽诱导率和正常花芽率高于日光灯管。4.在花芽分化初期,低水平的ABA、GA3和高水平的IAA、ZR有利于春兰根状茎的花芽诱导;4种内源激素在盛花期都达到峰值;ZR/IAA、ABA/IAA比值降低与ZR/GA3、ABA/GA3比值升高有利于花芽的形成,ZR/IAA、ABA/IAA、ZR/GA3比值升高和ABA/GA3比值降低有利于花芽的发育。外源NAA浓度升高时,与ABA和ABA/GA3成反比,与IAA、GA3和ZR成正比;该条件下不利于春兰开花;外源6-BA浓度升高时,与IAA和GA3成反比,与ABA/IAA、ZR/GA3和ABA/GA3比值成正比;该条件下有利于春兰开花。
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