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目的:探究合欢花减轻APAP诱导的急性肝损伤的有效成分及其作用机制,为其在治疗APAP诱导的急性肝损伤方面的开发应用提供科学依据。方法:以人正常肝细胞L-02细胞为受试对象,采用MTT法检测合欢花不同部位提取物对APAP损伤的L-02细胞活力的影响,筛选有效部位。采用液质联用技术分析鉴定有效部位中的化学成分,选择主要成分进行活性筛选,并结合相关文献,确定有效成分。建立APAP急性肝损伤的BALB/c小鼠模型,灌胃给予小鼠不同浓度的有效成分,验证有效成分的体内抗急性肝损伤作用。观察有效成分对小鼠肝脏外观、脏器系数的影响;苏木精-伊红(H&E)染色判断肝脏组织的病理生理结构变化;生化试剂盒检测小鼠血清中ALT、AST和LDH的含量,及小鼠肝组织匀浆中SOD、GSH、GSH-Px、CAT和MDA的含量;免疫组化染色检测小鼠肝脏中活性氧(ROS)、F4/80的变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定小鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。建立APAP诱导的L-02细胞损伤模型,并设置对照组(Control)、药物组(Que)、模型组(APAP)和治疗组(APAP+Que)等试验组,在细胞分子层面探讨槲皮苷的作用机制。流式细胞仪测定细胞内ROS水平的变化;生化试剂盒测定线粒体NADH脱氢酶活性;MTT法检测APAP或APAP和NADH脱氢酶抑制剂鱼藤酮组合对空白组(Blank)和给药组(Que)肝细胞存活率的影响;Western blot检测各组L-02细胞中NADH脱氢酶蛋白的表达。结果:MTT法筛选结果显示乙酸乙酯部位为合欢花减轻APAP诱导的急性肝损伤的有效部位,当乙酸乙酯部位浓度达到80μg/mL时,细胞存活率上升到94.86±1.21%;液质联用结果表明,乙酸乙酯部位化学成分主要为黄酮苷类,包括杨梅苷、异槲皮苷、木犀草苷、番石榴苷、槲皮苷和阿福豆苷,其中槲皮苷(Que)含量占乙酸乙酯部位总含量的90%以上,为主要化学成分;活性筛选显示APAP(10 mM)造模使细胞存活率下降到66.26±1.54%,而经过槲皮苷的预处理,细胞存活率明显上升(P<0.01),当槲皮苷浓度达到80 mM时,细胞存活率上升至96.03±1.26%。整体动物实验结果表明,与对照组(Control)相比,模型组(APAP)小鼠肝脏脏器系数显著升高(P<0.01),肝细胞大面积凝固性坏死,ALT、AST和LDH水平均显著升高(P<0.01),提示造模成功;与APAP组相比,槲皮苷各剂量预处理组小鼠的肝组织细胞结构趋于正常,中、高剂量组小鼠肝脏脏器系数显著降低(P<0.01),各剂量组小鼠血清中ALT、AST和LDH水平显著降低(P<0.05或P<0.01);与Control组相比,槲皮苷低、中剂量组的ALT、AST和LDH及高剂量组的ALT水平具有显著性差异(P<0.01),高剂量组AST、LDH则无显著性差异。与Control组相比,APAP组小鼠肝组织中F4/80显著上升(P<0.01),血清中的IL-6和TNF-α水平显著升高(P<0.01);与APAP组相比,槲皮苷各剂量组F4/80显著降低(P<0.01),IL-6和TNF-α水平显著降低(P<0.01);与Control组相比,槲皮苷低、中剂量组的F4/80、IL-6和TNF-α具有显著性差异(P<0.01),高剂量组F4/80、IL-6和TNF-α则无显著性差异。与Control组相比,APAP组小鼠肝脏ROS水平显著上升(P<0.01),肝组织匀浆中SOD、GSH、GSH-Px和CAT水平明显降低(P<0.01),MDA含量明显增加(P<0.01);与APAP组相比,槲皮苷各剂量组的ROS水平明显下降(P<0.01),肝组织中SOD、GSH、GSH-Px和CAT的水平显著提升(P<0.05或P<0.01),并呈现剂量依赖性,中剂量组和高剂量组能显著降低MDA水平(P<0.05或P<0.01);与Control组相比,槲皮苷各剂量组的ROS、CAT和低、中剂量组的GSH、MDA以及低剂量组的SOD、GSH-Px具有显著性差异(P<0.05或P<0.01),中、高剂量组SOD、GSH-Px和高剂量组GSH、MDA则无显著性差异。在细胞分子层面探讨槲皮苷的作用机制研究方面,流式细胞仪检测结果表明,与Control组相比,APAP组L-02细胞ROS水平显著提高(P<0.01);与APAP组相比,治疗组(APAP+Que)ROS水平显著下降(P<0.01);与Control组相比,APAP+Que组ROS水平无显著性差异。NADH脱氢酶活性测定实验表明,与Control组相比,APAP组NADH脱氢酶活性显著下降(P<0.01);与APAP组相比,APAP+Que组NADH脱氢酶活性显著上升(P<0.05);与Control组相比,APAP+Que组NADH脱氢酶活性无显著性差异。MTT法检测各组细胞存活率的结果表明,与APAP处理相比,APAP和NADH脱氢酶抑制剂鱼藤酮的组合处理显著降低了槲皮苷组细胞的存活(P<0.01)。Western blot试验结果表明,与Control组相比,APAP组L-02细胞内NADH脱氢酶蛋白表达显著降低(P<0.01);与APAP组相比,APAP+Que组细胞中NADH脱氢酶表达显著上升(P<0.01)。结论:1.合欢花乙酸乙酯部位能有效减轻APAP诱导的L-02细胞损伤,其主要有效化学成分为槲皮苷。2.槲皮苷能有效减轻APAP诱导的小鼠急性肝损伤,并能降低小鼠肝组织炎症因子水平和氧化应激受损程度。3.槲皮苷通过上调受损细胞线粒体中NADH脱氢酶的表达,提高NADH脱氢酶活性,使细胞内ROS产生减少,避免细胞遭受氧化应激,最终减轻APAP诱导的细胞受损。本研究明确了合欢花中槲皮苷为减轻APAP诱导的急性肝损伤的有效成分,并进一步阐释了其作用机制。