论文部分内容阅读
目的：本文运用正交设计对碎米、大米、玉米酶法制注射葡萄糖工艺的重点步骤液化、糖化、阴阳离子柱交换工艺进行优化研究,并通过全过程的微生物检测(包括菌落总数、霉菌酵母计数及代谢产物HPLC检测),构建与全工艺并驾齐驱的微生物生长状态及代谢产物的变化趋势。方法：运用正交设计方差分析优选最优工艺,分别以DE值、葡萄糖纯度为标准衡量液化糖化、阴阳离子交换的结果。以2010版药典附录微生物限度检查法为主,参考国家安全标准GB47892-2010和GB478915-2010的检测方法,对最优工艺全过程样品进行菌落总数和霉菌酵母菌菌落计数。运用高效液相色谱法建立最优工艺全过程样品代谢产物的指纹图谱,按中国药典委员会推荐的中药指纹图谱相似度评价系统2004A版计算碎米、大米、玉米全工艺代谢产物指纹图谱的相似度。结果：1.经正交设计方差分析得到了碎米、大米、玉米液化糖化、离子柱交换的最优工艺：碎米、大米、玉米分别为耐高温α-淀粉酶用量60u.g-1、60u.g-1、30u.g-1;液化时间40min、40min、30min;糖化酶用量150u.g-1、120u.g-’、120u.g-1;普鲁兰酶用量0.30apu.g-1、0.25apu.g-1、0.25apu.g-1;糖化时间48h、48h、60h;采用阳-阴离子柱床三组、两组、三组,离子树脂装量都为8g(阳)/9g(阴)；pH值均为4.5(阳)/10(阴),流速均为10mL/min.2.原料及全工艺茵落总数：原料(碎米、玉米、大米依次1.74×106、1.73×105、1.46×105)→漂洗(2.72×103、1.95×103、1.53×103)一液化(3.01×102、0.79×102、0.82×102)→糖化(4.27×102、1.38×102、0.92×102)→活性炭脱色(0.1×102、0.1×102、0.1×102)一阴阳离子柱除杂(…0…)→针用活性炭除杂(…0…)→结晶(…0…);原料及全工艺霉菌酵母菌菌落计数结果：原料碎米、玉米、大米依次(霉菌4.29×104、酵母茵6.89×104)(6.26×103、8.90×103)(8.84x102、1.08×103)→漂洗(6.01×102、7.35×102)(1.01×102、2.36×102)液化(0、1.46×102)(0、0.45×102)(0、0.33×102)→糖化(0、2.16×102)(0、0.56x102)(0、0.65×102)→活性炭脱色(0、0.03×102)(0、0.02×102)(0、0.03×102)→阴阳离子柱除杂(…0…)→针用活性炭除杂(…0…)→结晶(…0…)；经初步分离鉴定发现原料中存在毛霉属毛霉、曲霉属黄曲霉和黑曲霉、青霉属青霉菌、酵母菌。全工艺样品代谢产物指纹图谱相似度分析结果：碎米相似度范围0.01-0.99,大米相似度范围0.024-0.922,玉米相似度范围0-0.928,整体跨度大说明工艺对代谢产物的去除有一定的作用。结论：碎米、大米、玉米酶法制葡萄糖注射液工艺的优化方法简便可行。通过全过程同步的微生物存在状态跟踪检测,阐明生产工艺中微生物的生长状态,从宏观角度建立全工艺微生物菌体及代谢产物的体系,使全工艺微生物生长状态及代谢产物的变化明朗化,从微生物角度肯定了各除杂环节的作