人HRV感染HT-29细胞相关TLRs、炎性趋化因子表达及七味白术散的干预作用

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目的:探讨人轮状病毒(HRV)感染HT-29细胞相关TLRs、炎性趋化因子表达及七味白术散的干预作用。方法:选择无污染生长形态良好的HT-29细胞株分别用人轮状病毒(HRV)、柯萨奇病毒(CoxB3)、福氏痢疾杆菌(Shigella Flexneri)进行感染,并将各感染细胞随机分为模型组、七味白术散组、病毒唑组(为HRV与CoxB3感染阳性药物对照)、氟哌酸组(为痢疾杆菌感染阳性药物对照),同时设正常细胞对照组,37℃5%C02培养48h,收获培养物。采用RT-PCR技术测定TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、 TLR8mRNA及炎性趋化因子IP-10、TNF-α、EL-8mRNA的表达。结果:1.三种肠道病原体感染HT-29细胞后TLRs表达情况:1)HRV感染组TLR2mRNA含量与正常组比较差别无统计学意义(P>0.05),但明显低于Flexneri感染组、CoxB3感染组(P<0.05)。2)HRV感染组TLR3mRNA表达含量均明显高于CoxB3组、Flexner感染组、正常组(P<0.05); CoxB3组、Flexner感染组分别与正常组比较TLR3mRNA表达水平均无统计学意义(P>0.05)。3)HRV感染组TLR4mRNA表达高于正常组(P<0.05)、低于CoxB3组(P<0.05)、低于Flexner组(P<0.05);Flexner感染组TLR4mRNA表达增高,与CoxB3组比较有统计学意义(P<0.05)。4)HRV感染组TLR7mRNA、TLR8mRNA表达明显高于正常组(P<0.05),同时高于CoxB3组、Flexner:组,差别有统计学意义(P<0.05)。2.七味白术散的干预结果:1)与正常组比较,HRV+七味白术散组TLR3、TLR7、TLR8mRNA均显著升高(P<0.05), HRV+七味白术散组与模型组比较TLR3. TLR7、TLR8mRNA表达均下调,具有统计学意义(P<0.05), HRV+七味白术散组与病毒唑组比较无统计学意义(P>0.05); CoxB3+七味白术散组与正常组比较TLR7、TLR8mRNA表达显著升高(P<0.05), CoxB3+七味白术散组与模型组比较TLR7、TLR8的表达均下调(P<0.05),与病毒唑组比较,CoxB3+七味白术散组TLR7mRNA的表达无显著差异(P>0.05),TLR8mRNA表达升高(P<0.05)。2)与正常组比较,模型组IP-10. TNF-α、IL-8mRNA的表达均明显升高(P<0.05);七味白术散治疗组中上述三种趋化因子mRNA表达与模型组比较均降低,有统计学意义(P<0.05);七味白术散组与病毒唑组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:1.本研究进一步证实:TLR2、TLR4不能识别]HRV dsRNA.2.HT-29细胞被HRV感染后,细胞内TLR3mRNA、TLR7mRNA、 TLR8mRNA表达上调。3.七味白术散不能完全阻断TLR3对HRV dsRNA的识别作用和TLR7、TLR8对HRV的应答。4.七味白术散通过下调趋化因子IP-10mRNA、TNF-amRNA、 IL-8mRNA的表达,减轻HRV所致的炎症病理反应。
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