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目的观察痰瘀同治法对高糖诱导损伤的心肌微血管内皮细胞（cardiac microvasular endothelial cells,CMECs）保护作用,探讨通过调节AGEs-RAGE信号通路干预糖尿病心肌微血管病变的部分机制,揭示痰瘀同治法防治糖尿病心肌微血管病变的分子机制。方法1.大鼠CMECs的分离、培养及鉴定选取SD大鼠1只,无菌的条件下取大鼠的左心室游离壁以消化法分离并在孵育箱中培养大鼠CMECs,根据细胞的特征经过鉴定后进行传代备用。2.大鼠含药血清和空白血清的制备选取雄性SD大鼠60只适应性喂养3 d。其中40只大鼠以每组10只分别按剂量为4.05 g/kg、4.05 g/kg、8.10 g/kg和0.3g/kg灌胃抵当汤、小陷胸汤,抵挡陷胸汤和ALT-711溶液,制备成含药血清（剂量按每日体外常规剂量的10倍给药）;另外20只大鼠灌胃等容积的蒸馏水,制备空白对照血清。每日灌胃2次,连续7 d。大鼠末次灌胃1 h后予以麻醉,进行腹主动脉取血,室温静置2 h,3000 r/min离心15 min取得上清液,56℃水浴灭活补体30 min,直径为0.22μm过微孔滤膜过滤除菌,将血清用5m L EP管进行分装,-80℃冰箱保存备用。3.实验分组及干预取对数生长期CMECs,进行消化、离心、并将其浓度调整为1×105/ml,细胞接种在6孔板上。设置6组,分别为空白对照（NC）组（空白对照血清）,模型（MC）组（葡萄糖+空白对照血清）、化瘀（DBS）组（葡萄糖+抵当汤含药血清）、化痰（RP）组（葡萄糖+小陷胸汤含药血清）、痰瘀同治（RPDBS）组（葡萄糖+抵当陷胸汤含药血清）和西药（ALT-711）组（葡萄糖+ALT-711汤含药血清）。在37℃、5%CO2孵育箱中培收集细胞,检测指标如下:（1）痰瘀同治法通过调节AGEs-RAGE信号轴保护高糖损伤的CMECs（1）MTT法筛选葡萄糖最佳造模浓度;（2）MTT法筛选含药血清保护造模细胞的最佳百分比;（3）ELISA法检测各组细胞AGEs含量;（4）免疫荧光、Western blot法和实时荧光定量PCR法检测细胞RAGE蛋白水平及基因水平的表达;（2）AGEs-RAGE信号轴激活氧化应激干预CMECs病变相关指标的检测（1）细胞色素c还原法检测NADPH氧化酶活性;（2）二氢乙锭（DHE）荧光探针法检测ROS水平。结果（1）经过鉴定,体外成功分离及培养大鼠CMECs。（2）痰瘀同治法通过抑制AGEs-RAGE信号轴过度激活保护高糖损伤的CMECs（1）MTT法筛选葡萄糖最佳造模浓度:在葡萄糖浓度为33 mmol/L,干预48 h后,造模细胞活力下降到50%左右,综合考虑选择浓度为33 mmol/L葡萄糖,干预48 h时为最佳高糖诱导损伤的心肌微血管内皮细胞造模条件。（2）MTT法筛选含药血清保护造模细胞的最佳百分比:在百分比为10%抵当陷胸汤含药血清干预造模细胞48 h时活力最好。（3）ELISA法检测AGEs含量:MC组较NC组,细胞内AGEs含量显著升高（P<0.01）;各用药组AGEs含量较MC组均显著降低（P<0.01）,其中RPDBS组较RP组和DBS组,AGEs含量下降明显（P<0.01）,RBDBS组和ALT-711组的AGEs含量下降效果相当（P>0.05）。（4）免疫荧光、Western blot法和实时荧光定量法检测内皮细胞RAGE蛋白水平及基因水平的表达:与NC组比较,MC组的内皮细胞的蛋白阳性表达增多（P<0.01）,基因表达水平升高（P<0.01）;与MC组相比,各用药组的蛋白及基因表达显著降低（P<0.01）;其中RPDBS组RP组和DBS组比较,RAGE蛋白水平和基因水平降低明显（P<0.01,P<0.05）。（3）AGEs-RAGE信号轴抑制氧化应激反应从而防治CMECs病变（1）细胞色素c还原法检测NADPH氧化酶活性:MC组与NC组比较,内皮细胞NADPH氧化酶活性水平升高（P<0.01）;与MC组比较,各用药组NADPH氧化酶活性水平均显著降低（P<0.01）,其中RPDBS组和ALT-711组NADPH氧化酶活性降低水平效果相当（P>0.05）;RP组、DBS组分别和RPDBS组比较,NADPH氧化酶活性降低水平有统计学意义（P<0.01）。（2）荧光探针法检测细胞ROS水平:与NC组比较,MC组ROS水平明显升高（P<0.01）;与MC组比较,各用药组ROS水平均显著降低（P<0.01）,其中RPDBS组和ALT-711组ROS水平降低效果相当（P>0.05）;RPDBS组和RP组比较,RPDBS组ROS水平降低明显（P<0.01）,RPDBS组和DBS组比较,两组ROS水平降低效果相当（P>0.05）。结论痰瘀同治法可能通过抑制AGEs-RAGE信号轴的过度激活以及抑制氧化应激反应对高糖损伤的CMECs起到保护作用,从而干预糖尿病心肌微血管病变。