【摘 要】
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背景食管癌是世界范围内的一种常见的恶性肿瘤,其发病率居恶性肿瘤的第8位,死亡率居癌症死因的第6位。目前治疗手段以外科手术、放化疗为主,治疗效果迄今仍未臻满意。我们前期在相同TNM病理分期而预后不同的食管癌组织样本中运用高通量micro RNA芯片杂交技术发现,micro RNA-198（miR-198）在预后较差组织中表达显著升高。本论文拟在分子水平研究miR-198对食管癌细胞增殖、凋亡、迁移生
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背景食管癌是世界范围内的一种常见的恶性肿瘤,其发病率居恶性肿瘤的第8位,死亡率居癌症死因的第6位。目前治疗手段以外科手术、放化疗为主,治疗效果迄今仍未臻满意。我们前期在相同TNM病理分期而预后不同的食管癌组织样本中运用高通量micro RNA芯片杂交技术发现,micro RNA-198（miR-198）在预后较差组织中表达显著升高。本论文拟在分子水平研究miR-198对食管癌细胞增殖、凋亡、迁移生物学特性的影响,研究结果有助于进一步阐明miR-198在食管癌发生和发展中扮演的角色,并将为miR-198及其靶基因用于食管癌的分子分型、预后判断、分子靶向治疗及临床治疗方案的选择等临床转化研究奠定理论和实验基础。目的研究miR-198异常表达对食管癌细胞增殖、凋亡、迁移等生物学特性及其候选靶基因初步作用。方法实时荧光定量PCR（qPCR）法检测miR-198在不同食管癌细胞株中的表达情况。采用miR-198模拟物（mimics）、miR-198抑制物（inhibitor）靶向改变miR-198在食管癌细胞株EC9706的表达;利用噻唑蓝（MTT）法、平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell小室实验、划痕实验等方法观察miR-198异常表达对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及迁移等生物学特性的影响。利用Target Scan、miRTar Base、Diana、Pictar四个miRNA靶基因预测数据库预测miRNA-198作用候选靶基因,并运用q PCR的方法检测食管癌细胞中过表达miRNA-198对候选靶基因PTEN（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten）初步作用。结果（1）qPCR检测结果表明:miR-198在食管癌细胞株EC9706的表达明显高于在Eca109中的表达（P<0.01）;（2）食管癌细胞株EC9706转染mimics或inhibitor后miR-198的表达明显上调或下调（P<0.05）;（3）MTT检测和平板克隆形成实验结果表明:miR-198表达上调或下调对食管癌细胞EC9706增殖无明显影响（P>0.05）;（4）流式细胞仪检测细胞凋亡率和qPCR检测凋亡相关基因Bcl2、Bax表达结果显示:miR-198异常表达对食管癌细胞EC9706凋亡无显著影响（P>0.05）;（5）细胞Transwell实验和划痕实验结果:与对照组比较,miR-198 mimics组迁移至下室的细胞数明显增多;miR-198 inhibitor组实验结果则相反（P<0.05）。miR-198mimics组在12 h、24 h、48 h细胞迁移距离大于对照组;inhibitor组在12 h、24 h、48 h细胞迁移距离小于对照组,差异有统计学意义（P<0.01）;（6）qPCR检测结果显示,miR-198候选靶基因PTEN在miR-198过表达的食管癌细胞EC9706中表达量显著降低（P<0.01）。结论（1）miR-198在食管癌细胞EC9706细胞株中高表达;（2）上调miR-198的表达能够促进食管癌细胞EC9706的迁移但对细胞的增殖和凋亡无明显影响;（3）miR-198表达上调可降低候选靶基因PTEN在食管癌细胞EC9706中的表达。
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