基因重组干扰素如IFN-α(IFN-α包括IFNα-2a,IFNα-2b,IFNα-1b等)及其修饰体(如多价干扰素)已经作为抗病毒和免疫调节类药物,被广泛用于临床,治疗多种病毒性疾病和抗肿瘤等。所谓天然的干扰素α(IFN-α)是指细胞经过诱导而表达产生的细胞因子,通过信号传导继而发挥抗病毒、抗细胞增殖和调节免疫应答作用,然而,作为一个小分子蛋白,IFN-α在血浆中清除的速度比较快,其半衰期仅为数十分钟,导致在临床治疗中需要重复多次用药才能达到治疗效果。这样不仅给患者增加痛苦和经济负担,还会出现药物的峰谷现象,难以达到治疗效果并容易产生副作用。因此,迫切需要探索一系列增长IFN在体内的半衰期的方法。在本研究中,为了延长IFN-α在血浆中的半衰期,我们利用免疫球蛋白具有在血液循环中长效半衰期的特性,构建了编码人源IFNα-2b和免疫球蛋白Fc片段的基因重组融合蛋白。同时,对Fc片段中可诱导细胞杀伤活性(包括ADCC和CDC活性)的个别位点进行了改造,以降低免疫球蛋白Fc片段可能导致的副作用。构建的融合蛋白既能保持干扰素的活性并带有天然的N端,又具有抗体的优越性,其Fc片段的CH2,CH3区域可以用于ProteinA的亲和层析,为蛋白纯化提供了方便;而且保留的抗体铰链link部分使两个有效分子之间的功能互不影响。为了进一步延长融合蛋白在血浆中的半衰期,我们通过定点突变的方式对IgG的Fc片段进行改造,使Fc与FcRn结合能力更强。另外,本研究中还采用了新型的甲醇诱导型酵母表达系统,达到高效和低成本的效果。研究中对表达融合蛋白毕赤酵母的高密度发酵培养以及产物纯化工艺进行初步探索。经过纯化的融合蛋白,其纯度可以达到90%以上,对于后期的蛋白活性检测和临床试验研究提供材料,为将来的药物开发设计和应用提供良好的前景。