论文部分内容阅读
AD是一种渐行性退化的神经系统疾病,其病理特征主要有老年斑、神经纤维缠结、神经元丢失等。其中老年斑主要由Aβ引起,神经纤维缠结主要由Tau的过度磷酸化引起,它们都涉及到了蛋白错误折叠和聚集这一问题。大量研究表明,AD的病因与错误折叠的蛋白质不断地在脑部积累所导致的神经功能异常并最终导致神经元的凋亡密切相关。目前对AD的药物治疗主要集中在AD本身的病理特征上,很少有针对于减少蛋白质的错误折叠来预防和治疗AD的药物。而热休克蛋白在防止蛋白质的错误折叠和聚集,修复错误折叠的蛋白质中发挥着重要作用,尤其是HSP70。研究表明,HSP70在减少Aβ的聚集与积累、恢复Tau蛋白体内平衡、减轻氧化应激程度、抑制神经炎症反应等方面发挥着非常重要的作用,因此可以将HSP70作为抗AD药物靶点来筛选抗AD药物。本研究以HSP70启动子作为目的基因,分别以EGFP和Luciferase作为报告基因,构建pHSP70-EGFP和pGL3-HSP70重组载体,转染HEK 293T细胞,从而构建了基于pHSP70-EGFP的定性筛选细胞模型和基于pGL3-HSP70的定量筛选细胞模型。通过对有关老年痴呆的古方和验方的收集整理,对复方中出现的单味药按照出现的频率进行排序,以其中的单味药作为候选药物,利用定性和定量筛选HSP70启动子激活剂的细胞模型,优先对出现频率较多的35个单味药进行筛选,筛选得到四个HSP70启动子激活剂:黄芩、石菖蒲、蜘蛛香、五味子。用Aβ25-35构建AD细胞模型对这四个单味药水煎液的抗AD效果进行评价,得到的这四个HSP70启动子激活剂都能减少Aβ25-35的细胞毒性,其中黄芩效果最优,同时黄芩水煎液还能抑制PC12细胞的凋亡。综上所述,通过基于HSP70启动子筛选得到的黄芩水煎液具有作为抗AD药物候选物的潜力。