死亡时间(Time of death)的准确推断在对于刑事侦破具有至关重要的意义，它是确定侦查方向和侦查范围、确定和排除犯罪嫌疑人的重要依据。但长期以来死亡时间推断一直是法医学的难题。 近年来建立在昆虫基础上的死亡时间推断受到广泛的关注，主要根据昆虫的生长发育规律和演替规律推断死亡时间，昆虫学方法不仅对于高度腐败尸体的死亡时间推断有效，对于新鲜尸体的死亡时间推断也相比传统方法准确。一系列因素影响着昆虫推断死亡时间的有效性，包括温度、湿度、季节、风力、光照等。这些因素的价值大部分已经得到研。 大多数的案件在夜间发生，但也有很多案件在白天发生。可以说，在一天的几乎任何时刻都有可能发生死亡案件。同时，昆虫在一天中的活动具有节律性。有的在白天活动，比如蝇类；有的晚上活动，比如甲虫；在白天的不同时刻不同蝇类活动也不同，比如丝光绿蝇喜早晚活动，大头金蝇喜欢正午活动。假如一个尸体出现的时间是在昆虫不活跃的时刻，则昆虫的入侵就会晚一些，而一个尸体在昆虫的最活跃时刻出现，则有可能昆虫立即入侵尸体。但是，在一天的不同时刻出现的尸体，昆虫到达尸体的情况有何不同，其后昆虫的演替规律有何不同?这些情况对于死亡时间的推断有何影响?目前尚未见报道。 为了明确在一天不同时刻死亡的尸体对于昆虫入侵尸体情况的影响及随后昆虫演替模式的影响，以便为依据昆虫证据的死亡时间判断提供依据。我们开展了本研究。 材料与方法材料： 猪(Susscrra domestwa)6头，体重在15公斤左右。其他材料为捕虫网、防护网(防止猪尸体被野狗等动物拖食)、乙醚、75﹪乙醇及乙酸乙酯等。 方法： 实验地点：本次研究的地点为番禺区殡仪馆附近，地理位置大约在北纬22°26～23°05、东经113°14～113°42之间。 观察持续时间：自猪被处死时开始观察，直至尸体历经各腐败阶段达到白骨化期为止。 观察次数标准：在第一周内每四h观察一次。第二周尸体将进入后腐败期时每天观察两次，至后腐败期每天观察一次直至观察结束。 猪的处死方式：钝器暴力打击颅脑损伤瞬间致死。 实验过程：分别于2006年7月20日11：00、2006年7月20日15：00、2006年7月20日19：00、2006年7月20日23：00、2006年7月21日01：00、2006年7月21日04：00、2006年7月21日07：00处死6头猪。具体工作内容包括以下几点： 1．观察内容：第一，拍照并记录6头猪尸体腐败过程；第二，记录当天的天气情况以及尸体所处位置的环境温度；第三，记录6头猪尸体上的尸食性昆虫的种类。第四，记录6头猪尸体上昆虫活动的关键时间点；第五，记录6头尸体上蝇类幼虫的发育情况；第六，记录尸体上其他种类昆虫的发生和活动情况。 2．标本的采集与制作 成虫标本的采集与制作：将管扣尸体上不同种类的昆虫成虫置于乙酸乙酯瓶中处死后用昆虫针在三级台上制成标本。 幼虫标本的采集与制作：将采集到的幼虫置入XA溶液(75﹪乙醇：乙酸乙酯=1∶1)以处死幼虫，而后置入有75﹪乙醇的指形管内密封保存；置标签于指形管上，标签上要注明采集日期、时间和温度，留待种属鉴定与测量体长。 3．数据的处理 应用统计学方法(SPSS及DPS)处理实验过程中收集到的数据。 结果： 1.猪尸体上昆虫的种类 通过观察，各尸体上的昆虫种类无明显差异，所出现的主要类群为：大头金蝇(Chrysomyamegacephala)、绯颜裸金蝇(Achoetandrus rufifacies)、丝光绿蝇(Luciliasericata)、蚤蝇类(Phondae)、厚环黑蝇(spinigera Stein)、麻蝇类(Sarcophagidae)、家蝇(Muscoidea)、鼓翅蝇类(Sepsidae)、黑水虻(Hermetia illucen)黄蜂类(Vespidae)皮蠹类(Dermestidae)、赤足郭公甲(Necrobiarufipes)、赤颈郭公甲(Necrobia，.uricDllis)、阎甲类(Histeridae)、隐翅甲类(Staphylinidae)、蛆症金蝇(Chrysomyabezziana)。 2.不同时刻死亡猪尸体的腐败历期及各阶段所需要的时间 人为将整个腐败过程分为新鲜期、肿胀期、腐败期、后腐败期及白骨化期5个阶段。 各阶段所经历时间见表2及图一。各期所历经平均时间分别为：新鲜期，29.75±7.43h：肿胀期，53.83±7.43h：腐败期，85.3±4.5h；后腐败期，595.1±5.2h。可以看出，在夏季，猪尸体的腐败所经历很短，大约经历595.1±5.2h就出现白骨化。各尸体所经历的时间从死亡时间推断的水平来看没有明显差异。 3.不同时刻死亡尸体对蝇类入侵尸体的影响 白天死亡的尸体(如A号、B号及C号)，在死亡后1～4h即有蝇类成虫入侵，并随之产卵。夜晚死亡的尸体，天亮之后才有蝇类成虫入侵(如D号、E号及F号)并产卵。在白天的不同时刻，早晨及傍晚出现的尸体，蝇类成虫能够很快到达尸体；而中午出现的尸体，成虫大约在4h之后入侵尸体。 4.不同死亡时刻对尸体上的昆虫演替模式的影响 在蝇幼虫成熟之前，6头猪尸体上观察到了两种蝇幼虫发育模式：其中正午至天黑前出现的尸体，幼虫体长表现为明显不同的两批，幼虫随后爬离尸体及化蛹等活动均表现为两批；而夜晚至第二天正午前出现的尸体，幼虫发育非常均一，幼虫大量爬离尸体及化蛹活动只有1次。当然，对于以上两种发育模式，都有数量很少的其余批次出现，但由于数量较少可以忽略。 5.不同死亡时刻对尸体上蝇类幼虫发育的影响 6头猪尸体上大头金蝇幼虫平均最大体长随时间变化的情况见表4。6头猪尸体上蝇类幼虫的体长均随着时间的推移而增长，其变化过程可以用logisitic曲线很好的模拟出来，见图2，拟合方程分别为： A，Y=I.2356/(1+e<7.7255-9.8381X>)(R=0.9268)： B，Y=2146.4/(1+e<97689-1.9536X>)(R=0.9788)； C，Y=1.5799/(1+e<9.7589-1.9536X>)(R=0.9757)； D，Y=2.6486/(1+e<2.41/85-3.0554X>)(R=0.9946)； E，Y=1.1168/(1+e<2.2586-4.4526X>)(R=0.9866)； F，Y=1.2624/(1+e<2.0861-3.5157X>)(R=0.9889)。 将6头猪尸体上的蝇类幼虫体长随时间变化情况综合，得综合方程：Y=3.3947/(1+e<2.7418-1.8679X>)(R=0.9584)。拟合曲线图3。其中Y代表幼虫体长(cm)，x代表死亡时间(h)。 6.不同死亡时刻尸体匕蝇类活动的关键时间点 蝇类在猪尸体上活动呈现出几个关键时间点：蝇幼虫遍布尸体；蝇幼虫最初爬离尸体；蝇幼虫大量爬离尸体；蝇幼虫最初化蛹；蝇幼虫大量化蛹；蝇蛹最初羽化；蛹大量羽化；蝇成虫消失；蝇幼虫消失。各关键时间点的历经时间见表5。 7．6头猪尸体上蝇类的演替规律 6头猪尸体上昆虫的大体演替情况：在尸体死后第1至3天有大量的蝇类入侵，并在尸体上产卵，孵化的幼虫在尸体上经过4天左右发育成熟，进入周围土中化蛹，经过3天左右羽化成蝇，不同蝇类之间上述时间可能有少许差别。但其演替过程均呈现出一定的顺序。 此外，在尸体进入腐败期之后，在尸体下方的泥土中可见厚环黑蝇幼虫、郭公甲成虫及阎甲成虫长期存在。各昆虫的具体演替情况详见表6～9及附图。 8．实验过程中气温及6头猪尸体尸温的变化情况 自尸体进入肿胀期，一直到后腐败期，由于腐败产热以及蝇类幼虫活动时产生的积温效应，尸体的温度普遍高于环境温度。一旦尸体残余骨架，软组织被吃光，此时气温与尸温的差别消失。 结论： 1．本研究通过观察一天内不同时刻处死的6头猪尸体的腐败过程，发现不同时刻死亡猪尸体的新鲜期及肿胀期历经时间具有差异，随着腐败的进行，后续各期时间上的差异消失。 2．不同死亡时刻影响蝇类入侵尸体的时间以及随后尸体上蝇类幼虫的演替模式。 3．探讨了不同时刻死亡尸体上蝇类活动的关键时间点。同时我们建立了蝇类幼虫体长随时间变化规律的logistic方程。 4．上述结果将为法医日常检案工作中类似环境下高度腐败尸体甚至白骨化尸体的死亡时间推断提供理论依据。