箭叶淫羊藿及近缘种的类胡萝卜素含量的测定及类胡萝卜素合成途径基因的克隆分析

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yjun198
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淫羊藿是我国传统的药用植物,具有补肾阳、强筋骨和祛风湿等多种功效,目前淫羊藿的研究主要集中于宏观调查其种类与分布、类黄酮物质提取方法的研究和药理作用分析等,但是关于淫羊藿属的次生代谢物质--类胡萝卜素的研究尚未见报道。淫羊藿是小檗科的古老双子叶植物类群,研究其类胡萝卜素的含量和代谢分子机制对于研究类胡萝卜代谢途径在双子叶植物中的进化具有重要的意义。   利用分光光度法,测定了淫羊藿属9个种成熟叶片中类胡萝卜素的含量,结果表明类胡萝卜素含量在淫羊藿种间有明显差异。其中,黔北淫羊藿(Epimediumboreali-guizhouense)叶片中的类胡萝卜素含量最高,达36.792mg/kg;而粗毛淫羊藿(Epimediumacuminatum)叶片中中的类胡萝卜素含量最低,仅18.72mg/kg。与其他植物相比,淫羊藿属植物叶片的类胡萝卜素含量偏低。在箭叶淫羊藿(Epimediumsagittatum)中,克隆到了4个(EpPSY、EpZDS、EpLcyB和EpCCD)参与类胡萝卜素生物合成途径的关键酶编码基因的全长cDNA,3个基因的(EpLcyE、EpZEP和EpNCED)长约1kb的3cDNA末端序列,并获得了EpLcyB的基因组全长序列,发现有1个长294bp的5’UTR内含子。分析获得全长cDNA序列的四个基因发现都有完整的ORF、有各种氨基酸特异性位点以及类胡萝卜素合成酶特异的保守的氨基酸结构域。利用半定量RT-PCR技术,分析了EpPSY、EpZDS、EpLcyB和EpCCD在箭叶淫羊藿根、茎、叶、花和果实中表达量的变化,结合不同组织中类胡萝卜素含量的差异,结果表明这些基因的表达与类胡萝卜素含量是高度相关的。
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