漆酶是一种重要的木质素降解酶,在木质素降解、腐殖质形成过程中发挥重要作用,对与木质素结构相似的许多环境污染物也有明显的降解能力。漆酶在环境保护、造纸工业、食品工业及生物传感器工业等领域有广泛的应用价值,目前已成为研究的热点。漆酶在自然界中主要由白腐菌产生,但白腐菌产漆酶的能力较低,很难适用工业发酵的要求。同真菌漆酶比较,细菌漆酶具有不需糖基化、热力学稳定性好,酶活最适pH广泛等优点。本实验室己从土壤中筛选到的一株产漆酶细菌lac7,并进行了初步的酶活检测与鉴定,但产酶量较低,为克服这一困难,本研究试图从lac7基因组中克隆出编码细菌漆酶的基因,在大肠杆菌表达系统中大量表达,分离纯化获得纯酶并进行初步的酶学分析,为后续细菌漆酶的开发利用创建一个良好的平台。论文共分为四个部分。1.lac7漆酶基因的克隆。以提取的DNA为模板进行pcr,扩增产物经测序与Blast分析,判定为漆酶基因片段。其长度为821bp。2.漆酶高级结构的预测。利用生物信息学的知识对漆酶的高级结构进行预测,然后再分别使用PSIPRED和pymol初步解析了漆酶的二级和三级结构,获得了较为理想的三维立体模式图。3.lac7漆酶基因在大肠杆菌中的表达。将克隆的细菌漆酶基因插入到细菌质粒表达载体pET21b上,转化到细菌宿主细胞BL21（DE3）中进行表达。经一系列诱导表达条件摸索发现使用0.6mmol/LIPTG在30℃诱导4小时表达的效较佳。经Ni2+离子层析柱一步纯化,获得纯净的酶蛋白。SDS-PAGE电泳表明,重组蛋白的相对分子量为30kDa。4.漆酶的酶学性质研究。对该酶的酶学性质研究分析发现,lac7细菌漆酶最适反应温度为37℃,以ABTS为底物测定该酶的最适反应pH为3.0,以DMP为底物时该酶的最适反应pH为8.0。测得该酶在37℃,pH8.0的条件下催化DMP氧化反应Km值为0.624mmol/L, Vmax为0.33μM/ml/min, Kcat为1.32×10³s^-1在相同温度pH3.0的条件下催化氧化ABTS反应的Km值为6.01mmol/L,Vmax为0.63μM/ml/min, Kcat为7.6×10³s^-1。该酶具备良好的热稳定性,在80℃条件下处理30分钟仍能保持保持70%以上的活性.