绒毛膜癌简称绒癌，是一种高度恶性的滋养细胞肿瘤。它由滋养细胞干细胞(细胞滋养层细胞)发生恶性转化而形成，可继发于流产、异位妊娠、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、甚至是正常妊娠。绒癌的发生发展与滋养细胞的过度侵蚀作用密切相关，早期即可发生血道转移而危及患者生命。绒癌的发生是多种因素协同作用的结果，其中细胞信号转导通路在绒癌的形成过程中发挥了重要的作用。TGF-β信号转导通路是当今肿瘤防治领域探讨与钻研的焦点之一。转化生长因子β1（transforming growth factor beta，TGF-β1）是滋养细胞在侵袭母体的过程当中研究最多的细胞调节因子，它主要是通过TGF-β1信号转导通路在滋养细胞肿瘤恶性侵袭与转移的过程中发挥自身的重要作用。P38丝裂原活化蛋白激酶（P38mitogen-activedprotein kinase，P38MAPK）是存在于人体细胞内的一类蛋白激酶，它属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶类别。P38MAPK主要参与人体细胞的生长、细胞发育、细胞分裂以及细胞凋亡等生理过程。P38MAPK信号转导通路是细胞内介导细胞外刺激的重要信号系统，在细胞恶变和肿瘤浸润转移过程中发挥关键作用。TGF-β1可以直接激活P38MAPK信号转导通路的上游激酶，从而间接地激活P38MAPK信号转导通路,参与肿瘤的发生与发展。在多种疾病发病机制的研究中，TGF-β1信号转导通路与P38MAPK信号转导通路存在一定的交互作用，但在绒癌发生的分子机制的研究中，两条信号转导通路之间是否存在相互作用的研究目前国内外罕见报道。本实验通过在低剂量TGF-β1刺激的绒癌JEG-3细胞模型上，分别采用TGF-β1受体（I和II）阻滞剂（LY364947）和P38抑制因子（SB203580）阻断两条信号转导通路，比较P38活化后的核转位以及P38、磷酸化P38蛋白水平的表达，从而揭示TGF-β1与P38MAPK信号转导通路在绒癌发生中的相互作用，对绒癌的恶性侵袭及转移的分子机制进行阐明并积累实验依据，为绒癌的临床治疗寻找新的作用靶点。目的用浓度为5ng/ml的TGF-β1预处理绒癌JEG-3细胞，在建立的细胞模型上，采用免疫荧光染色法检测P38活化后的核转位，Western blotting技术检测P38、磷酸化P38蛋白水平的表达，探讨TGF-β1及P38MAPK信号转导通路间的相互作用及作用的关键步骤，揭示绒癌恶性侵袭及转移的分子机制。方法1.细胞培养及细胞模型的建立：实验的主要研究对象为人绒癌JEG-3细胞系。此细胞系来源于中国协和医科大学基础医学研究所。将绒癌JEG-3细胞用含10%胎牛血清的1640完全培养基置于37℃、5%CO2培养箱中培养。当细胞长满至70%-80%时，按0.25%胰酶：0.02%EDTA为1:3的比例进行传代。取对数生长期的绒癌JEG-3细胞进行实验。将浓度为5ng/ml的TGF-β1作用于绒癌JEG-3细胞，同期设立空白对照组、1μM、3μM TGF-β1受体阻滞剂（LY364947）2个剂量组及1μM、3μM P38抑制因子（SB203580）2个剂量组。2.免疫荧光染色法检测P38活化后的核转位过程。3.免疫蛋白印迹法检测P38、磷酸化P38蛋白的表达水平。4.应用SPSS15.0统计学软件对实验数据进行统计学分析。结果1.免疫荧光染色结果1.1给予TGF-β1受体（I和II）阻滞剂（LY364947）后绒癌JEG-3细胞中P38的活化及核转位的情况免疫荧光染色法实验表明，TGF-β1受体阻滞剂作用于绒癌JEG-3细胞后，磷酸化P38在细胞核内的荧光染色强度减弱，与TGF-β1刺激组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）；磷酸化P38的核染色强度呈现浓度依赖效应，随着TGF-β1受体阻滞剂浓度的增加，磷酸化P38在细胞核内的荧光染色强度逐渐减弱（P＜0.05）。1.2给予P38MAPK抑制因子（SB203580）后绒癌JEG-3细胞中P38的活化及核转位的情况免疫荧光染色法实验表明，P38抑制因子作用于绒癌JEG-3细胞后，磷酸化P38在细胞核内的荧光染色强度减弱，与TGF-β1刺激组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）；磷酸化P38的核染色强度呈现一定的浓度效应，随着P38抑制因子浓度的增加，磷酸化P38在细胞核内的荧光染色强度逐渐减弱（P＜0.05）。2. Western blotting检测结果2.1TGF-β1受体（I和II）阻滞剂（LY364947）对绒癌JEG-3细胞中P38及磷酸化P38蛋白水平表达的影响实验表明，TGF-β1作用于绒癌JEG-3细胞后，P38及磷酸化P38的蛋白表达量显著增高，与空白对照组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）；而加入TGF-β1受体阻滞剂后，绒癌JEG-3细胞中P38及磷酸化P38的蛋白表达量减少，与TGF-β1刺激组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）；且呈现出浓度依赖效应，随TGF-β1受体阻滞剂作用浓度的增加，P38及磷酸化P38的蛋白表达量逐渐减少。2.2P38MAPK抑制因子（SB203580）对绒癌JEG-3细胞中P38及磷酸化P38蛋白水平表达的影响实验表明，P38抑制因子（SB203580）作用于绒癌JEG-3细胞后，P38及磷酸化P38的蛋白表达量减少，与TGF-β1刺激组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）；且表现出浓度依赖效应，P38及磷酸化P38的蛋白表达量随P38抑制因子作用浓度的增加而逐渐减少。结论：1.外源性TGF-β1可促进绒癌JEG-3细胞中P38活化后的核转位，并且可提高绒癌JEG-3细胞中P38及磷酸化P38的蛋白水平的表达。2. TGF-β1受体（I和II）阻滞剂（LY364947）可减弱绒癌JEG-3细胞中P38活化后的核转位，并且降低绒癌JEG-3细胞中P38及磷酸化P38蛋白水平的表达，且呈现良好的浓度依赖效应。3. P38抑制因子（SB203580）可减弱绒癌JEG-3细胞中P38活化后的核转位，并且降低绒癌JEG-3细胞中P38及磷酸化P38蛋白水平的表达，且表现出良好的浓度依赖效应。4. TGF-β1信号转导通路与P38MAPK信号转导通路在绒癌JEG-3细胞的恶性侵袭机制中存在着相互作用。