论文部分内容阅读
实验目的:通过蛋白质组学技术和方法,评价1周离心运动及4周递增负荷离心运动前后蛋白质的差异表达,较全面分析适应性运动对骨骼肌蛋白组的影响。实验方法:雄性SD大鼠,体重220-250g。按体重随机分为4组:1周对照组(1C),1周离心运动组(E1W,-16°,16m/min, 1h),4周对照组(4C),4周递增负荷离心运动组(E4W,第一周:-16°,16m/min, 1h;第二周:-16°,20m/min, 1h;第三周:-16°,20m/min,90min;第四周:-16°,20m/min,120min)。戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,腹主动脉取血后迅速取腓肠肌,在液氮中研磨至粉末状,三氯乙酸-丙酮沉淀过夜,加入蛋白裂解液(8 M urea,2M thiourea,4% CHAPS,1 mM PMSF,50μg/ml leupeptin,10μg/ml pepstatin, 50 mM DTT). Bradford法测蛋白浓度,进行等电聚焦,聚焦完成后直接进行SDS-PAGE (12%)电泳,银染,扫描后用PDQuest软件分析,对显著变化的蛋白点进行MALDI-TOF-TOF质谱鉴定。实验结果:肌纤维横截面积在一周中等强度离心运动以及四周递增负荷离心运动后12小时都发生肥大现象,肌纤维横截面积增大。实验组和对照组各检测出大约500个蛋白点。通过检测和分析,离心运动导致许多蛋白质的丰度发生变化。一周离心运动后,腓肠肌有199个蛋白点下调,182个蛋白点上调。在四周递增负荷离心运动训练后,有159个蛋白点上调和203个蛋白点下调。这些蛋白质涉及代谢、细胞结构和物质转运的变化。一周和四周离心运动后,MHCI比例和含量显著增加,而MHCIIx/b的比例和含量都有所下降。MHCIIb的含量在一周离心运动中变化不大,但在四周递增负荷离心运动中显著增加。结论:1)适应性离心运动后,肌纤维横截面积增大,慢肌比例增多,并且有氧代谢相关蛋白含量增加。2)适应性过程中,结构蛋白有明显的增加,是细胞骨架结构增强引起肌节的重建所致。3)四周递增负荷离心运动比一周中等强度离心运动可使肌纤维发生更明显的适应性变化。