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第一部分FOXP3去甲基化作为急性冠脉综合征患者调节性T细胞可靠标志的研究目的：调节性T细胞(regulatory T cells, Tregs)在急性冠脉综合征(acute coronary syndrome, ACS)中的作用机制尚不明确。主要障碍之一为缺乏调节性T细胞的特异性标志。在调节性T细胞FOXP3基因的第一内含子(FOXP3intron1,FOXP3i1)中,存在一段富含CpG岛的高度保守区域,这段区域在调节性T细胞中处于完全去甲基化状态。研究表明通过检测FOXP3i1去甲基化可鉴别调节性T细胞并研究其在临床疾病中的作用。本研究旨在探讨相较于调节性T细胞的表面标志,FOXP3i1去甲基化是否为检测急性冠脉综合征患者中调节性T细胞更加可靠的标志。方法：收集89例ACS患者与35例正常对照者的外周血,从不同水平研究调节性T细胞的表达：应用流式细胞术检钡CD4+CD25highFOXP3+Tregs和CD4+CD25highCD45+naive Tregs的表达比例；应用焦磷酸测序技术检钡FOXP3i1去甲基化水平；应用ELISA法检测调节性T细胞相关抗炎因子IL-10、TGF-β1及致炎因子IFN-γ的含量。结果：相较于正常对照人群,FOXP3i1去甲基化检测显示ACS患者外周血调节性T细胞的数量明显减少(p=0.0005);然而,应用流式细胞术未发现ACS患者外周血CD4+CD25highFOXP3+Tregs表达的降低；值得关注的是,相较于正常对照组与老年ACS患者,青年ACS患者外周血CD4+CD25highFOXP3+Tregs的表达上调,但CD4+CD25highCD45+naive Tregs的表达下调。各组血清中IL-10的含量未见明显差异,青年ACS患者中TGF-β1含量较老年ACS组明显升高(p=0.004),青年ACS患者中IFN-γ的含量在各组中最高(p=0.002)。结论：通过FOXP3去甲基化检测ACS患者外周血调节性T细胞的减少,在提示ACS患者外周免疫耐受缺陷的同时,也是衡量ACS发生的潜在指标。第二部分DNA甲基化抑制剂对急性冠脉综合征患者调节性T细胞的影响目的：实验研究表明甲基化抑制剂DAC可以提高调节性T细胞的表达,从而治疗移植物抗宿主病,及糖尿病等。目前,FDA已批准甲基化抑制剂DAC用于骨髓增生异常综合征及部分白血病的临床治疗。但是DAC在动脉粥样硬化中的作用还未见报道,本研究旨在探讨甲基化抑制剂是否通过调控调节性T细胞的表达,从而改善急性冠脉综合征患者的免疫稳态。方法：收集20例ACS患者的外周血,分离外周单核细胞并采用磁珠分选出CD4+CD25+T细胞,体外活化培养并给予甲基化抑制齐DAC (2,5um),以空白组作对照,培养细胞72小时后收集细胞,应用流式细胞术检钡FOXP3+Tregs的表达比例,实时定量PCR技术检钡FOXP3mRNA的表达,焦磷酸测序技术检测FOXP3i1去甲基化的水平以及ELISA法检测培养上清液中TGF-β1,IL-10,和IFN-γ的含量。结果：ACS患者外周血CD4+CD25+T细胞在培养72小时后,FOXP3+Tregs的表达比例,FOXP3mRNA的表达和FOXP3i1去甲基化水平明显升高,并呈现剂量依赖性；细胞培养上清液中IL-10的含量明显升高,IFN-γ的含量明显降低,并呈现剂量依赖性。结论：甲基化抑制剂DAC在体外可显著提高调节性T细胞的表达,从而改善急性冠脉综合征患者的免疫稳态。