七鳃鳗Syk的克隆表达、生物信息学分析及相关免疫学研究

来源 :辽宁师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:missyouwqq
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
Syk(spleen tyrosine kinase)是非受体型酪氨酸激酶家族成员之一。在脊椎动物中,Syk是B细胞受体信号通路的主成部分,也能调节B淋巴细胞的许多生理功能。通过七鳃鳗血液数据库中搜索Syk基因的EST序列,找到一条有效序列,将得到的序列与海七鳃鳗数据库比对,确定了Syk基因的序列。通过3’RACE扩增实验以及开放阅读框高保真酶扩增,成功得到了七鳃鳗Syk基因全长序列。通过不同物种的Syk氨基酸序列比对,构建系统发育树,分析Syk不同物种的亲源关系。此外,还对Syk基因进行结构预测,通过MEME在线软件对保守基序预测以及抗原表位预测。利用Real-time PCR检测法,分析对照组和混合菌刺激组的相对表达量,结果显示在未用混合菌刺激时,Syk在七鳃鳗组织中广泛表达,当混合菌刺激后,Syk的表达量都有所上调,其中在鳃、白细胞、肾和心的表达量明显上调,在髓样小体中的表达量也有上调趋势。进一步通过Western Blot检测,以β-actin为内参,在未刺激时,Syk在鳃、髓样小体和白细胞中表达,经过混合菌刺激后,Syk在髓样小体和白细胞中表达量明显上调,以上均有统计学意义。由此表明Syk在七鳃鳗免疫调控过程中起到了无法替代的作用。然后进行原核表达载体的构建,并成功在表达菌BL21中进行表达。初步利用免疫沉淀的方法并通过质谱鉴定两种蛋白可能与Syk有相互作用产生。通过在白细胞中分析Syk免疫前后细胞定位,结果显示,在免疫前后Syk均定位于细胞质中。以上数据,有助于在分子水平上探索脊椎动物中Syk蛋白适应性免疫系统的起源与进化以及一些新功能的研究提供了线索。
其他文献
本文描述了生物试样中安定、利眠宁、舒宁药物及其代谢降解产物,二苯甲酮类、N-去甲安定、脱氧利眠宁、喹唑啉类衍生物的GC/MS分析法,讨论了热解和水解过程。安定、利眠宁、
<正>二次函数y=ax2+bx+c(a≠0)的图象是一条抛物线,为轴对称图形,对称轴为x=-b/2a.因此,我们就有结论:若A(x1,y1)、B(x2,y2)为抛物线上一对对称点,则有(x1+x2)/2=-b/2a,y1=y2.下面谈
[目的]探讨老年痴呆病人应用桌面小组游戏模式对情绪改善的效果研究。[方法]选择住院老年痴呆病人68例,定期参与桌面小组游戏活动,采用简易精神状态检查表(MMSE)、老年痴呆生
分析了铁粉、铜粉在冷等静压下材料的致密化过程。常用的Fleck和Shima模型得到了应用和讨论。与实验数据对比可知:不考虑基体材料塑性硬化的Fleck模型可较好地模拟金属粉末在冷等静压下的致密
目的探讨II区或II+III区骨盆肿瘤切除后,使用3D打印半骨盆假体重建骨缺损的可行性及优越性。方法 2014年12月至2016年11月,共有40例骨盆II区或II+III区肿瘤患者于本中心进行
政务公开是加强基层民主政治建设,保证人民群众行使民主权利的重要途径,是建设央行文化的重要方面。本文就基层央行政务公开工作中存在的问题,有针对性地提出做好基层央行政
面向培养实用型、技术型移动应用开发软件人才的需求,从教学内容、学习方式、职业能力等几方面探讨如何在移动开发教学中进行学生的编程思维能力训练,介绍培养学生编程思维能
目的了解海口市免疫规划疫苗针对传染病的人群免疫水平,评价免疫预防接种效果,为下一步调整免疫规划策略提供科学的依据。方法采用分层整群抽样方法,对988名健康儿童的抗体水
二次函数是初中数学教学的一个重要内容,也是每年中考的必考内容。二次函数按课标要求可分为四个部分:二次函数的意义、图象与性质;如何求二次函数的解析式;会利用二次函数的
随着经济的发展,人们的生活水平不断提高,城市环境也得以不断改善,多层建筑的装饰标准与质量要求也越来越高,造价比重也就越来越大。我们知道,质量是工程建设"百年大计"的最