论文部分内容阅读
本文对Periaxin--PDZ结构域进行了研究。在周围神经系统中，施旺细胞相互紧密连接呈螺旋状包裹轴突，形成髓鞘，调节神经元轴突的直径、离子通道分布、神经丝磷酸化，并分泌多种神经营养因子促进神经元存活。在周围神经损伤后，施旺细胞逆分化形成Büngner带引导神经轴突再生，同时施旺细胞也参与清除溃变的轴突和髓鞘。施旺细胞不能正常发育将直接影响神经纤维的形成，以致产生各种疾病如腓骨肌萎缩症、肿瘤，甚至死亡。Periaxin蛋白是有髓施旺细胞非致密髓鞘(Non-compact myelin)中的重要蛋白之一，若编码该蛋白的基因失常，会导致脱髓鞘的发生而影响神经冲动的传递，引起腓骨肌萎缩症4F亚型发生。由于Periaxin主要位于髓鞘化施旺细胞的轴周膜上，因此，将其命名为轴周蛋白，在轴周膜上它可与dystrophin-relatedprotein2(DRP2)，DG结合成复合物，该复合物的正确定位可能在髓鞘的完整性以及稳定性中发挥重要的作用。Periaxin蛋白含有四个结构域，分别是PDZ结构域、NLS结构域、Repeat结构域和酸性结构域。PDZ结构域作为一种重要的蛋白与蛋白相互作用的结构域，参与细胞内的许多重要的生理功能。本文围绕Periaxin中的PDZ结构域展开以下工作。首先将Periaxin-PDZ结构域基因编码序列克隆到表达载体pETM-3C或pGEX4T-2，并在E.coli BL21中进行表达，重组表达产物经Ni2+-NTA column或GSTSephrose4B column，Sephacryl S-200凝胶层析获得电泳纯的重组PDZ。其次，利用荧光光谱、蛋白质与脂质体覆盖法、还原与非还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳以及DTT还原与H2O2氧化诱导等方法分析，揭示Periaxin-PDZ具有脂质结合的能力和较强的钙离子结合能力，氧化条件对Periaxin-PDZ结构域分子状态有明显的影响，可引起Periaxin-PDZ结构域二聚化。Periaxin-PDZ二聚体形成明显削弱其与膜脂的结合，而钙离子的结合会促进Periaxin-PDZ结构域与膜脂的结合。