在纤维中上调和抑制GhPIS与GhPSS的表达对棉花纤维发育的影响

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棉花是世界上最重要的天然纤维作物之一;棉花纤维是极度伸长的单细胞,纤维素占棉纤维的90%以上,所以,棉花纤维细胞又是研究细胞伸长与次生壁合成的理想材料。脂代谢在植物生长发育中有重要作用,但脂代谢在纤维细胞伸长和次生壁增厚中的作用尚未阐明。  磷脂酰肌醇和磷脂酰丝氨酸是植物中相对含量较少、但在细胞的生长发育过程中有着重要作用的两种细胞脂质。磷脂酰肌醇合成酶(PIS)是合成磷脂酰肌醇(PI)的关键酶。前人研究表明磷脂酰肌醇的磷酸化物质参与细胞极性生长、信号传导以及各种生物的和非生物的胁迫等。磷脂酰丝氨酸合成酶(PSS)是合成磷脂酰丝氨酸(PS)的关键酶。拟南芥中AtPSS对花粉发育和花序分生组织的生长有重要作用。为了研究磷脂酰肌醇和磷脂酰丝氨酸对棉花纤维发育的影响,本研究在纤维中分别上调和抑制GhPIS与GhPSS的表达,通过改变磷脂酰肌醇和磷脂酰丝氨酸的合成,探究它们对纤维发育的影响。主要研究结果如下:  1、GhPIS与GhPSS在纤维发育不同时期的表达特性  利用Real-Time PCR分别检测GhPIS与GhPSS在纤维发育不同时期的表达。结果表明,GhPIS在纤维快速伸长期和次生壁合成期均有较高表达,GhPSS在纤维次生壁合成期高表达;暗示GhPIS可能与纤维的伸长和次生壁合成有关,而GhPSS可能主要参与纤维次生壁的合成。  2、抑制剂LY294002阻碍纤维伸长  用磷脂酰肌醇磷酸化过程中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的抑制剂LY294002处理0DPA的胚珠,培养13d。观察纤维发育的结果表明,LY294002能够明显抑制纤维的伸长,表明磷脂酰肌醇途径所产生的磷肌醇类物质参与了纤维细胞的伸长。  3、上调和抑制GhPIS的表达对纤维发育的影响  利用纤维特异启动子SCFP控制GhPIS在纤维中的表达,调控PI的合成。通过薄层层析分析转基因植株中PI含量变化,结果显示,纤维特异上调GhPIS可使22DPA纤维中PI的含量相比野生型略有增加,而胚珠中PI含量无明显变化。抑制GhPIS的表达,纤维中PI的含量降低。纤维品质检测结果表明,上调GhPIS的表达,SCFP::GhPIS转基因棉花的纤维长度与野生型相比有所增加。  上述结果表明,GhPIS具有合成磷脂酰肌醇的生物学功能,磷脂酰肌醇途径所产生的磷肌醇类物质对纤维伸长有重要作用。在纤维中上调GhPIS的表达能够促进转基因棉花纤维的伸长。  4、上调和抑制GhPSS的表达对纤维次生壁沉积的影响  利用GC-MS检测转基因棉花22DPA纤维中脂肪酸相对含量,结果显示,上调GhPSS的表达,不饱和脂肪酸(18:2和18:3)的含量略有增加;而抑制GhPSS的表达,不饱和脂肪酸(18:2和18:3)的含量降低。此外,抑制GhPSS的表达,与次生壁沉积相关的纤维素合成酶基因GhCESAs的表达降低。推测,抑制GhPSS的表达,干扰了纤维素合成酶基因的表达,进而阻碍了纤维素在次生壁的沉积,转基因棉花的衣分减少、马克隆值降低映证了这一推测。  上述结果表明,抑制GhPSS的表达,不饱和脂肪酸的含量降低;同时,次生壁纤维素的合成受到阻碍,转基因棉花的马克隆值降低、衣分减少,推测GhPSS参与纤维次生壁合成的调控。
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