漳州水仙鳞茎盘转录组分析及类黄酮合成途径基因的表达

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中国水仙(Narcissus tazetta var. chinensis)为石蒜科水仙属多花水仙类的多年生草本植物,水仙品种较少,颜色单一,改良中国水仙花色一直以来都是广大研究者对水仙的研究重点之一。本研究以漳州水仙为材料,通过对不同器官色素显色分析及原花青素定性分析、水仙鳞茎盘转录组测序以及qPCR分析类黄酮合成途径结构基因和调控因子的表达,探讨漳州水仙类黄酮途径不同分支的生物合成及其分子基础。本研究主要获得以下研究成果:1.漳州水仙中的主要类黄酮物质为黄酮醇和原花青素。水仙花瓣和副冠部位主要成分是黄酮醇,鳞茎盘中主要成分原花青素,且原花青素单体为儿茶素。水仙花瓣和副冠中没有检测到原花青素和花青素,这可能是导致水仙花颜色单一的主要原因之一。2.以水仙鳞茎盘为材料,提取RNA,基于Illumina平台进行转录组测序,此次测序共获得4,934,557,168bp数据量,其中reads数24,430,849条。组装出36,006个unigene, unigene平均读长706bp,N50读长1,084,超过500的的unigene有16,059个,从而构建了水仙鳞茎盘转录组数据库。3.通过Blast数据库比对、序列分析、系统进化树等方法,筛选和确认漳州水仙中类黄酮生物合成相关的结构基因和调控因子,共获得4个NtCHS,2个NtCHI、3个NtF3H,3个NtUFGT,2个NtMYB以及NtF3’H、NtDFR、NtLAR、NtbHLH和NtWD40各一个基因,在数据库中,没有发现原花青素途径关键基因ANR及花青素途径关键基因ANS。4.通过qPCR技术对水仙鳞茎盘转录组数据库中删选得到的类黄酮合成相关10个基因的共19个家族成员在漳州水仙全开期、半开期和花蕾期三个时期的花瓣与副冠以及叶片和鳞茎盘中的表达模式进行分析,结果发现,含有多个基因的家族基因都表现出不同的表达模式;NtLAR在水仙鳞茎盘部位高表达,NtFLS在水仙花瓣与副冠中高表达,与这两部分器官中类黄酮的成分相吻合;NtMYB1促进NtDFR的表达,而NtMYB2可能对NtDFR起负调控作用;NtbHLH也可能参与NtDFR的表达的正调控。本研究获得了漳州水仙类黄酮合成途径结构基因和部分调控因子,初步解析了漳州水仙类黄酮合成途径基因表达与不同分支代谢的关系,为水仙花色改良提供了依据和宝贵的基因资源,具有重要的理论及实际意义。
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