灵芝从古至今被人们看作扶正固本和延年益寿的珍品,灵芝子实体及孢子粉均可入药。灵芝具有多种生物活性成分,其中主要的是灵芝多糖与灵芝三萜类化合物,目前诸多研究表明二者均具有提高免疫力的作用。灵芝三萜类化合物存在于乙醇提取物中。本文首先建立了灵芝子实体、孢子粉和破壁孢子粉中灵芝多糖及乙醇提取物的制备方法,其次对灵芝多糖及乙醇提取物的组成进行了分析,最后对灵芝多糖及乙醇提取物进行了细胞免疫活性的研究,结果如下:1.灵芝子实体、孢子粉和破壁孢子粉乙醇提取物的制备及成分分析利用单因素实验与正交试验,以总三萜的产率为指标,对灵芝乙醇提取物的提取工艺进行优化。得到最佳工艺为,子实体乙醇提取物的提取条件为30倍量的65%乙醇回流提取三次,每次1.5 h;破壁孢子粉的提取条件为10倍量的65%乙醇回流提取两次,每次2 h;孢子粉的提取条件为10倍量的65%乙醇回流提取三次,每次2 h。总三萜的产率分别为0.74%、0.23%和0.90%。利用液质联用技术分别对灵芝子实体、孢子粉与破壁孢子粉乙醇提取物中的三萜类组分进行成分分析,分别鉴定出三萜类化合物29个、13个和8个。2.灵芝子实体、孢子粉和破壁孢子粉多糖组分的制备及单糖组成的分析利用醇浸水提醇沉的工艺提取灵芝中的多糖,子实体、孢子粉与破壁孢子粉多糖的产率分别为0.57%、1.26%和2.65%。对子实体、孢子粉与破壁孢子粉粗多糖分别进行分级纯化。利用气质联用技术分别对灵芝子实体、孢子粉与破壁孢子粉中小于5000 Da的级份和大于1×106 Da的多糖组分进行单糖的组成分析。结果表明,不同级份均富含葡萄糖,其它单糖的组成和百分比随着级份的不同而不同。其中子实体分子量小于5000Da级份和分子量大于1×106 Da级份的单糖均由阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、核糖、木糖、葡萄糖、鼠李糖和岩藻糖组成;孢子粉分子量小于5000 Da级份和分子量大于1×106 Da级份均含有半乳糖、甘露糖、葡萄糖和葡萄糖醛酸;破壁孢子粉分子量小于5000 Da级份和分子量大于1×106 Da级份均含有半乳糖、甘露糖和葡萄糖。3.灵芝子实体、孢子粉和破壁孢子粉乙醇提取物和多糖组分对小鼠细胞免疫功能的影响利用小鼠脾细胞增殖实验,分别考察子实体、孢子粉与破壁孢子粉的乙醇提取物、粗多糖、分子量小于5000 Da的多糖和分子量大于1×106 Da的多糖对小鼠细胞免疫的影响。结果表明,在刀豆蛋白(ConA)协同作用下各样品对小鼠脾细胞增殖均具有显著促进作用,表明各给药组具有增强小鼠细胞免疫功能。从经济效益考虑,增强免疫力的灵芝样品优选子实体乙醇提取物。综上所述,本研究建立了灵芝子实体、孢子粉和破壁孢子粉乙醇提取物提取制备工艺和多糖的制备分级方法,并进行了产率测定;对灵芝子实体、孢子粉和破壁孢子粉乙醇提取物和多糖组分进行了成分分析;采用体外实验证明,灵芝子实体、孢子粉和破壁孢子粉乙醇提取物和多糖组分具有增强小鼠细胞免疫功能的作用。本研究成果为深入研究灵芝子实体、孢子粉和破壁孢子粉的药效物质研究提供了参考依据,同时为灵芝保健品的开发提供了理论依据。