论文部分内容阅读
第一部分TRAIL基因多态性与中国山东汉族人慢性乙型肝炎的相关性研究背景:乙型肝炎是由乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染引起的肝脏炎症性病变,是我国当前流行最广、危害最严重的一种传染病,其中约5%-10%感染者可转为慢性,迁延数年,反复活动,甚至转变为肝硬化或肝癌。乙型肝炎慢性化与多种因素有关,包括年龄、免疫功能、饮酒、合并感染或药物等。目前,凋亡因子在慢性乙型肝炎病变过程中的作用已引起许多学者的关注。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor relatedapoptosis inducing ligand,TRAIL),是1995年由Wiley发现并命名的,人TRAIL基因定位于染色体3q26,由5个外显子组成,编码1.77 kb mRNA,并可编码281个氨基酸残基组成的分子量为32.5 KDa的Ⅱ型跨膜蛋白。TRAIL属于TNF超家族成员,其结构与该家族的其他成员相仿。TRAIL可通过与其受体结合,诱导细胞凋亡,或发挥其他生物学作用。近几年通过临床资料及动物实验研究,发现TRAIL的表达水平与乙肝病毒在人体的感染呈现相关性,外周血sTRAIL的分泌能够从一定程度上反映HBV感染后疾病的进展及肝脏的损伤状况,表明TRAIL参与乙型病毒性肝炎的致病过程,但TRAIL的多态性是否与慢性乙型肝炎的发生有关尚未见报道。目的:通过检测慢性乙型肝炎和健康对照组人群TRAIL基因第五外显子3’-非编码区(3’-untranslated region,3’-UTR)1525G/A、1595C/T位点基因单核苷酸多态性(SNPs),探讨慢性乙型肝炎与TRAIL基因SNPs的关联性。方法:采用病例对照的方法,收集确诊的慢性乙型肝炎患者187例,同时选择142例健康个体作为对照。全部选择对象均空腹抽取静脉血,通过聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性(polymerase chain reaction-Restrictionfragmem length polymorphism,PCR-RFLP)法检测两组人群TRAIL基因第五外显子3’-非编码区1525/1595两位点基因多态性。结果:1.TRAIL等位基因1525G/A和1595C/T在病例组和对照组中的分布已达到遗传平衡。病例组(x~2=1.207,P=0.547)和对照组(x~2=0.917,P=0.632)P值均大于0.05,无显著性差异。2.TRAIL基因1525位点检测到GG、GA、AA三种基因型,从1595位点检测到CC、CT、TT三种基因型。并发现TRAIL基因1525位点的GG、GA、AA基因型分布分别与1595位点的CC、CT、TT基因型一一对应。3.正常对照组中,男性的TRAIL基因1525G/A和1595C/T位点三种基因型1525GG/1595CC、1525GA/1595CT、1525AA/1595TT的出现频率分别为34.2%、41.0%、24.8%;女性出现频率分别为24.0%、60.0%、16.0%,TRAIL 1525G/A和1595C/T位点SNPs在男性、女性中分布无显著性差异(x~2=3.016,P=0.221),说明在正常个体中TRAIL基因1525及1595位点三种基因型分布无性别差异,该位点SNPs与性别无关。4.慢性乙型肝炎组中,男性TRAIL基因1525G/A和1595C/T位点三种基因型1525GG/1595CC、1525GA/1595CT、1525AA/1595TT的出现频率分别为39.2%、51.0%、9.8%;女性出现频率分别为14.7%、61.8%、23.5%,两组比较有显著性差异(x~2=9.680,P=0.008),提示在慢性乙型肝炎患者中,1525G/A、1595C/T位点SNPs与性别有关,在女性中多表现为1525AA/1595TT纯合,而在男性中多表现为1525GG/1595CC纯合。5.TRAIL1525G/A和1595C/位点三种基因型1525GG/1595CC、1525GA/1595CT、1525AA/1595TT在对照组中出现频率分别为32.4%、44.4%、23.2%:而慢性乙型肝炎组出现频率分别为34.8%、52.9%、12.3%,两组比较有显著性差异(x~2=7.014,P=0.03)。但等位基因1595C/1525G和1595T/1525A在对照组与病例组中的分布无显著性差异(x~2=2.940,P=0.086)。6.慢性乙肝HBeAg阳性患者TRAIL基因1525G/A和1595C/T位点三种基因型1525GG/1595CC、1525GA/1595CT、1525AA/1595TT出现频率分别为39.0%、50.5%、10.5%,与对照组比较有显著性差异(x~2=6.230,P=0.044);而慢性乙肝HBeAg阴性患者出现频率分别为24.2%、59.7%、16.1%,与对照组比较无显著性差异(x~2=4.070,P=0.131)。慢性乙肝HBeAg阳性与阴性患者TRAIL基因1525G/A和1595C/T位点SNPs比较也无显著性差异(x~2=3.970,P=0.137)。结论:中国汉族人存在TRAIL基因1525G/A、1595C/T多态位点,且1525G/A、1595C/T位点SNPs情况完全一致。TRAIL基因1525G/A、1595C/T位点的SNPs在正常人群的分布无性别差异,而在慢性乙型肝炎患者中的分布存在性别差异。慢性乙肝HBeAg阳性患者与正常人比较,TRAIL基因1525G/A、1595C/T位点SNPs有显著差异;而慢性乙肝HBeAg阴性患者与正常人比较,TRAIL基因15256/A、1595C/T位点SNPs无显著差异。TRAIL基因1525G/A、1595C/T位点SNPs在慢性乙型肝炎组与正常人群的分布有显著差异,提示TRAIL SNPs与慢性乙型肝炎的易感性有关。第二部分慢性乙型肝炎患者外周血中睾酮的变化及其意义背景乙型肝炎是由乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染引起的肝脏炎症性病变,是我国当前流行最广、危害最严重的一种传染病,其中约5%-10%感染者可转为慢性,迁延数年,反复活动,甚至转变为肝硬化或肝癌。乙型肝炎慢性化与多种因素有关,包括年龄、免疫功能、饮酒、合并感染或药物等。近年来研究发现,慢性乙型肝炎患者男性明显多于女性,至于性激素是否在该病的发生中起一定作用,目前尚未见相关研究。在睾酮与肝癌的相关性研究中,发现HBsAg阳性的肝癌患者其血清睾酮水平显著高于HBsAg阴性患者,为进一步明确血清睾酮水平与慢性乙型肝炎发生的相关性,本文采用电化学发光法检测了65例慢性乙型肝炎患者及35例正常人血清中的睾酮水平,并进一步检测分析了睾酮与其他生化指标的相关性,旨在探讨血清雄激素睾酮在慢性乙型肝炎发生中的作用及其意义,为慢性乙型肝炎的预防、诊断及治疗提供新的思路。目的探讨睾酮水平与慢性乙型肝炎发生的相关性。方法用电化学发光法测定65例慢性乙型肝炎患者和35例健康者血清睾酮水平,同时用临床化学国际联盟(IFCC)推荐方法分别检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷氨酸氨基转移酶(AST)以及γ-谷氨酰基转肽酶(GGT),DCA终点法检测血清总胆红素(TBIL),AMP法检测碱性磷酸酶(ALP),免疫比浊法检测免疫球蛋白IgG、IgM、IgA,荧光定量PCR检测外周血HBV DNA水平。结果慢性乙型肝炎患者血清睾酮水平显著高于正常对照组(P＜0.01),尤其以20-40岁的慢性乙型肝炎患者血清睾酮升高最为明显,HBeAg阳性患者较HBeAg阴性患者升高明显,但差别无显著意义(P＞0.05)。慢性乙型肝炎患者肝功血清学指标ALT、AST、TBIL、GGT、ALP及IgG水平显著高于正常人(P＜0.05),但乙肝患者睾酮水平与ALT等生化指标及HBV DNA水平无明显相关性,与免疫球蛋白IgG呈中等负相关(P＜0.05)。结论慢性乙型肝炎患者血清睾酮水平显著高于正常人,睾酮水平升高可作为慢性乙型肝炎的易感因素之一。