【摘 要】
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目的:探讨长链非编码RNA-HCG18(lncRNA-HCG18)在肺癌中发生发展的机制研究。方法:(1)通过对肺癌组织进行深度测序,表达谱基因芯片中筛选差异表达基因;利用生物信息学软件分析
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目的:探讨长链非编码RNA-HCG18(lncRNA-HCG18)在肺癌中发生发展的机制研究。方法:(1)通过对肺癌组织进行深度测序,表达谱基因芯片中筛选差异表达基因;利用生物信息学软件分析TCGA数据库中肺癌组织的癌与癌旁差异表达;实时定量RT-PCR检测100对临床肺癌组织癌与癌旁中差异基因的表达水平。(2)细胞功能学验证:cck-8法实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期;细胞划痕实验用于检测细胞的迁移能力;Transwell实验测定细胞的侵袭能力;裸鼠成瘤实验等检测敲减目的基因后肺癌细胞在体内成瘤能力。(3)使用转录因子靶点预测数据库Starbase数据库预测HCG18结合位点;通过荧光素酶报告基因检测基因结合位点;核质分离实验确定目的基因亚细胞功能定位;Western Blot技术和免疫组化方法验证目的基因功能机制作用。结果:(1)芯片表达谱结果显示,lncRNA-HCG18在肺癌中高表达(p<0.05);临床样本与TCGA显示lncRNA-HCG18癌组织表达水平高于癌旁组织(p<0.05);(2)细胞功能学实验验证lncRNA-HCG18发挥促癌基因的作用,cck-8法实验结果显示敲低lncRNA-HCG18抑制细胞的增殖能力(p<0.05);Transwell实验结果显示敲低lncRNA-HCG18抑制细胞的侵袭能力(p<0.05);细胞划痕实验结果显示敲低lncRNA-HCG18可以抑制肺癌细胞的迁移能力(p<0.05);PI染色流式细胞术结果显示lncRNA-HCG18与细胞周期并无关联,差异无统计学意义(p>0.05);裸鼠成瘤实验结果显示敲低lncRNA-HCG18表达后肿瘤生长直径减小(p<0.05);(3)核质分离实验结果显示lncRNA-HCG18定位于细胞质;软件预测lncRNA-HCG18与has-miR195-5p及ATG14存在结合位点;双荧光素酶报告基因实验、qPCR、western blot和免疫组化方法检测表明敲减lncRNA-HCG18后ATG14在瘤组织中低表达(p<0.05),说明lncRNA-HCG18可以调控miR-195/ATG14通路,促进肺癌的发生发展。结论:lncRNA-HCG18在肺腺癌中高表达,功能实验证实,lncRNA-HCG18在体内外可以促进增殖、侵袭转移等恶性表型。机制实验证实,lncRNA-HCG18可以通过miRNAs分子"海绵"作用影响miR-195-5p的活性,与ATG14竞争性结合miR-195-5p形成ceRNA模型,lncRNA-HCG18作为一个促癌基因表达增高后可导致ATG14表达增多,促进自噬,进而促进肺腺癌的发生发展。
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