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目的:为了了解肝癌外细胞微环境pH的改变对肝癌细胞的生物学影响以及机制;明确V-ATPase抑制剂KM91104对肝癌细胞生物学影响以及机制;探索肝癌外细胞微环境pH的作用机制与V-ATPase的联系。方法:以肝细胞LO-2细胞以及肝癌细胞SMC7721和HCCLM3细胞为研究对象,以细胞外微环境不同pH和不同浓度的KM91104为实验组,以原培养基为对照组,通过CCK8方法检测不同pH微环境下以及不同浓度的KM91104作用后各组实验组和对照组肝癌细胞的生存率的变化;选取适合的pH以及KM91104浓度进行后续实验。本研究使用划痕实验检测各组肝癌细胞迁移的变化;采用BCECF-AM荧光探针检测各组实验组和对照组肝癌细胞内H~+水平,并使用流式细胞仪检测荧光强度的变化。各组细胞分别经过PI染色和Annexin V-FITC/PI染色后通过流式细胞仪检测细胞周期以及细胞凋亡的变化。最后TRIzol一步法提取各组细胞总的RNA,qRT-PCR检测各组肝癌细胞V-ATPase亚基V1C2,V0D2以及caspase-3、cyclinB1的表达水平。结果:1.细胞外微环境大于p H8.2时,对LO-2细胞以及肝癌细胞的增殖具有显著的抑制作用,并且随着时间的增长存活率降低;细胞外碱性微环境时候,SMC7721细胞迁移明显被抑制,HCCLM3细胞迁移增强,细胞外酸性微环境能够促进肝癌细胞的迁移;pH8.4能够显著抑制V-ATPase的作用导致细胞内H~+浓度比对照组显著升高,促进了肝癌细胞的凋亡;细胞外微环境的pH改变以后使肝癌细胞G1期细胞比率升高,HCCLM3细胞周期延长,SMC7721周期缩短,并且肝癌细胞中V-ATPase亚基V1G1,V0D2表达水平显著升高。2.V-ATPase抑制剂KM91104对肝癌细胞的生长具有明显的抑制作用,并且随着浓度的增长抑制作用增强;KM91104显著抑制SMC7721迁移作用但是能促进HCCLM3细胞的迁移。KM91104能够抑制V-ATPase的作用导致肝癌细胞中的H~+的浓度升高,并且能够促进肝癌细胞的凋亡,使得肝癌细胞的周期发生明显变化,S期细胞比率升高,G2期细胞比率下降。KM91104作用于肝癌细胞后,肝癌细胞中V-ATPase亚基V1G1,V0D2表达水平显著升高。结论:1.碱性微环境能够一定程度上抑制肝癌细胞的生长促进肝癌细胞的凋亡同时抑制了V-ATPase功能。2.V-ATPase抑制剂KM91104能够抑制肝癌细胞的生长促进肝癌细胞的凋亡通过抑制了V-ATPase的功能。3.细胞碱性微环境作用于肝癌的机制可能通过与V-ATPase抑制剂作用机制一致,都是通过抑制V-ATPase的作用引起肝癌细胞生物学功能的变化。