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在我国肝癌死亡率位居恶性肿瘤死亡率的第二位,死于肝癌的患者占全球肝癌死亡人数的53%。尽管肝癌的临床诊治及基础研究均取得了丰硕的成果,但其总体预后并未得到显著改善,难以早期诊断而失去手术时机是重要原因之一。虽然甲胎蛋白仍然是肝癌早期诊断的最好指标,但其敏感度和特异性均不高,因此寻找一种简单、快速、高灵敏度和高特异性的诊断方法已成为临床医学的迫切需要。目前随着分子生物学技术的飞速发展,生命科学研究重点已经从结构基因组学转移到蛋白质组学上来。其中表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)是近些年来兴起的一种新的蛋白质组学的研究方法,其具有高通量性及高灵敏度,为研究疾病的发生、发展以及其早期生物标记物的检测,提供了强有力的平台,目前已用于多种疾病的检测和诊断的研究。本课题旨在利用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)检测乙肝后肝硬化和原发性肝癌两组患者的腹水,得到两组的蛋白质表达谱,分析比较两组差异表达蛋白并构建相应的诊断模型(pattern ),以其能从腹水中筛选乙肝后肝硬化患者和原发性肝癌患者蛋白质标志物及发现可以用于乙肝后肝硬化患者和原发性肝癌患者诊断的蛋白质组学构型,并为进一步研究提供线索和新的思路。第一部分蛋白芯片及的选择目的:从CM10、IMAC3-Cu这两种芯片中选择合适应用于乙肝后肝硬化和原发性肝癌患者腹水蛋白质指纹图谱研究的芯片种类。方法:选择乙肝后肝硬化和原发性肝癌患者腹水各12例,采用CM10、IMAC3-Cu两种蛋白芯片,经SELDI-TOF-MS技术测定蛋白质谱,筛选检测腹水蛋白的最佳芯片。结果:在1000-50000Da范围内,CM10芯片在各实验组捕获的蛋白峰数分别为:乙肝后肝硬化组103个;原发性肝癌组118个。IMAC3-Cu芯片在各实验组捕获的蛋白峰数分别为:乙肝后肝硬化组53个;原发性肝癌组57个。结论:CM10能得到更多的乙肝后肝硬化和原发性肝癌患者有显著意义的差异蛋白峰值,能更好的应用于本课题的研究。第二部分乙肝后肝硬化患者和原发性肝癌腹水蛋白标记物筛选和诊断模型的建立目的:寻找乙肝后肝硬化和原发性肝癌相关蛋白质及治疗靶点,初步构建乙肝后肝硬化患者与原发性肝癌患者诊断模型,并探讨其临床应用的可行性。方法:收集30例乙肝后肝硬化患者、29例原发性肝癌患者新鲜腹水,经分析选用Ciphergen公司的CM10芯片(弱阳离子芯片),利用SELDI-TOF-MS技术对样本进行检测,得到其蛋白质质谱扫描谱,并采用Ciphergen Biosystems软件对上述两组波谱进行两两比较分析。结果:1、在乙肝后肝硬化患者组与原发性肝癌组比较中发现24个蛋白峰在两组间的比较差异有统计学意义(P<0.05)。与乙肝后肝硬化患者腹水蛋白质谱相比,原发性肝癌患者腹水中16个差异蛋白峰表达上调,8个差异蛋白峰表达下调。2、软件从这24个差异蛋白峰中选取6个有显著差异的标志蛋白组合样式建立诊断模型,其模型双盲验证的准确率为81.35%(48/59),灵敏度为80.00% (24/30),特异度为82.75% (24/29),阳性预测值82.75%(24/29),阴性预测值为80.00%(24/30)。结论:1、乙肝后肝硬化患者组与原发性肝癌组间腹水蛋白图谱表达差异有统计学意义。肝细胞恶变可能在肝细胞再生过程中发生,即经肝细胞损害引起再生或不典型增生,此过程可能与这16个表达上调的差异蛋白峰相关。2、建立的诊断模型,能将乙肝后肝硬化患者与原发性肝癌患者进行有效地区分。3、SELDI-TOF-MS技术,结合生物信息学分析软件,在未来对乙肝后肝硬化和原发性肝癌临床诊断和治疗监测上将是一种很有前途的方法。