嗜热酶（thermozymes）是嗜热菌（thermopHiles）体内的一种热稳定性酶,其能够适应自然界中较高的温度条件并能在该恶劣环境中保持良好的生理状态。由于嗜热酶所具有的这种特性,其可以在许多依赖高温条件的工业生产过程中替代常规的、不耐热的化学试剂和常温酶,从而提高酶促反应速度,降低微生物污染的危险性,这些特点让这种酶在大规模工业生产中有更广阔的应用范围和更低的成本投入、更高的回报比例,因此这方面的研究具有可观的经济前景。本实验所研究的目的蛋白丙酮酸脱氢酶（E1蛋白）即是这样一种重要的嗜热酶。通过催化丙酮酸的氧化脱羧从而为三羧酸循环和激素合成输送乙酰辅酶A,丙酮酸脱氢酶复合体（PDC）在糖代谢中扮演了一个非常关键的角色。E1为PDC的重要组成部分,它催化了整个反应体系中非常关键的第一步。本论文实验以嗜热菌thermos thermopHiles HB8为材料,通过PCR技术扩增大肠杆菌丙酮酸脱氢酶（E1）基因,并将目的基因分别连接到克隆载体pGEM-T和表达载体pTrcHisC上,构建重组质粒。重组质粒pTrcHisC-E1在大肠杆菌中于20～25℃的温度下诱导4～6小时表达。利用Ni-NTA金属亲和层析的方法从总蛋白中提取E1蛋白,然后通过透析超滤管浓缩获得纯度、浓度较高的E1蛋白溶液,最后采用铁氰化钾法对其进行酶动力学测定。本实验成功构建了表达丙酮酸脱氢酶基因的载体,诱导表达并纯化出了具有酶反应活性的丙酮酸脱氢酶,经过酶动力学测定得到该嗜热菌E1的下列酶活性数据:其最适反应温度大约为76℃,最适反应pH值大约为8.5,V_max为278mol/（L.min）,K_m值为2.04mmol/L。本实验所取得的数据和经验拓展了丙酮酸脱氢酶研究的物种范围,扩充了嗜热酶的研究种类和研究方法,为将来进一步对丙酮酸脱氢酶系和嗜热菌生理功能的研究奠定了基础。