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中医历史上,一直有针药并用、杂合以治的观点。《内经》从理论上对针药结合进行了初步的总结,提出针药各有所宜、针药结合相须为用的学术观点,对后世产生了深远的影响。唐代孙思邈积极倡导针药兼用,从临床角度要求医生掌握针灸和药物两种治疗方法,达到相须为用的境界。现代研究发现通过针药结合,能产生新的更有利于各自作用发挥的因素。针灸调动机体内各种因素参加机体平衡的恢复过程,为药物的作用提供较好的基础状态(增加靶向性、提高药物与靶器官的亲和力),有利于协同发挥机体平衡的恢复作用。
五味子为木兰科(Magnoliaceae)多年生落叶木质藤本植物[Schisandrachinensis(turcz.)baill.]的成熟果实。五味子果实味酸、甘,性温。具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的功效。临床常用于治疗无黄疸型肝炎及慢性迁延性肝炎等肝部病症,同时用于保肝护肝,其效用为临床所验证。研究显示:五味子醇提物及五味子乙素、醇甲等成分对化学毒物引起的动物肝细胞损伤有明显保护作用,可抑制转氨酶的释放,使ALT活性降低;能明显诱导小鼠和大鼠肝微粒体细胞色素P-450活性,增加肝脏解毒能力;五味子对CCl4经肝微粒体代谢转化后生成的一氧化碳及其在代谢过程中对NADPH的消耗亦能有抑制作用;五味子有助于肝细胞蛋白质的合成,从而使线粒体恢复和增加,相应的酶活性增高,肝细胞得以恢复和再生,发挥降酶保肝作用。
近年来。国内一些学者认为,每个穴位都有之相联系的特定的器官系统。当该穴位受刺激后,只有与之相联系的特定器官系统会受到更大的影响。有研究发现针刺“内关”和“太冲”两穴能明显增加心脏和肝脏中川芎嗪的含量。足三里穴位和肝脏关系密切,目前大多文献还是集中在针灸保肝护肝的作用,对机制研究较少,如电针“足三里”等穴位能有效的保护四氯化碳、内毒素、酒精中毒、肝脏缺血等所致的大鼠肝损伤,效果较突出。
本研究以五味子为研究对象,分析针灸与其联用后效应物质基础的变化,系统开展肝靶向性分布、P450代谢酶活性、胆汁排泄等研究。阐明针灸能增强五味子的肝趋向性与效应物质基础变化的相关性,从细胞和分子水平对针药结合进行生物药剂学与药物动力学等研究,以创新性建立针药结合增强药物作用效应理论的研究方法,为针灸促进药物趋向性理论研究建立科学的评价体系。
本研究主要包括以下内容:
将小鼠分为空白组、模型组、阳性组、先针后药组、针药同时进行组和单给药组。除了空白外和模型组外注射CCl4橄榄油溶液造成急性肝损伤。17h后摘除一侧眼球取血,分离血清,测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力。结果表明:经五味子和针刺治疗,AST及ALT值明显降低,先针后药组,单给药组,针药同时进行组对小鼠的急性肝损有明显保护作用,而且针药同时进行组效果最好。同时针药同时进行结合的实验方法操作更简便,需要时间的更少,效率更好,因此以后的针灸方法为针药同时进行。
取针药结合的SD大鼠,给药前采血作为空白样品,在灌胃给药后绘制的一个完整的血药浓度-时间曲线,包括药物的吸收相、平衡相和消除相。整个采样时间至少应持续到3~5个半衰期,或持续到血药浓度为Cmax的1/10~1/20。采用LC-MS/MS仪测定血药浓度。然后采用中国药理学会推荐DAS软件进行数据处理。将试验中测得的各受试动物的血药浓度-时间数据分别进行药物动力学参数的估算,计算标识成分的药物动力学参数,包括有:Ka、Tmax(实测值)、Cmax(实测值)、AUC(梯形法求算)、Vd、Kel、t1/2和CL等。大鼠给药后,以药时曲线作参考,选3个时间点分别代表分布相、平衡相和消除相的药物分布。测定药物在心、肝、脾、肺、肾等组织的浓度。结果发现木脂素的药时曲线亦呈开放型二室模型,具有二次吸收。五味子木脂素成分在大鼠各脏器分布中最多的是肝,其次是肺和肾。结果表明五味子中的木质素成分在经过针灸后具有一定的肝靶向性。
将针药结合的大鼠处死取出肝脏,超速离心法制备肝微粒体,Lowery法进行微粒体蛋白含量测定绘制标准曲线。采用CO还原差示光谱法测定P450酶的含量。结果显示,大鼠肝微粒体CYP450水平均显著提高,其对丙咪嗪的体外代谢速率显著加快。结果表明五味子对大鼠CYP450有诱导作用,且与剂量或诱导时间有关,并且针灸增加了这种效应。
取清洁级SD大鼠禁食12h后进行实验,给大鼠腹腔注射乌拉坦麻醉,右颈动脉插管,并沿腹白线于剑突下划开腹部肌层约1cm做胆管插管,最后切开左腿皮肤暴露股静脉待其呼吸平稳后给药取血,收集胆汁。胆汁样品于给药前和给药后不同时间点收集,比较单给药组和针药结合组的胆汁收集量。结果显示经过针药结合的大鼠胆汁最多,其次是单给药组。以上结果显示,针药结合比单给药组更能增强胆汁排泄。
综上所述,本研究论文以五味子为研究对象,对经过针灸“足三里”穴位后其主要有效成分木脂素成分进行肝损伤、组织分布及代谢排泄等方面的研究。建立了血浆和主要组织中检测三种木脂素成分的HPLC-MS分析方法,结果表明,五味子经过针灸“足三里”穴位联用后,能有效保护四氯化碳所致的肝损伤,促进有效成分在主要组织的分布,增强P450酶的诱导效应,促进大鼠的胆汁排泄。本实验结阐明针药结合五味子相应物质基础与肝趋向性的关系,为针灸促进药物趋向性研究建立科学的研究体系。