Spastin与PDIA6相互作用调控海马神经元突起生长

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目的脊髓损伤后神经元的突起再生是损伤修复的关键点之一。本实验室已验证Spastin在促进海马神经元突起生长中发挥了重要作用。PDI家族作为蛋白折叠酶与分子伴侣,在许多神经系统疾病中发挥了重要的作用。而Spastin与PDI家族成员能否相互作用并影响神经元突起生长进而调控脊髓损伤修复仍有待探讨。本研究主要目的为PDI家族成员PDIA6是否参与了脊髓损伤及其修复的过程,并探索Spastin与PDIA6是否能相互作用,以及其相互作用如何影响海马神经元的突起生长。探索Spastin与PDIA6相互作用调控海马神经元突起生长不仅有助于我们进一步了解Spastin在神经元突起生长中的作用机制,也可以让我们更深入了解其在脊髓损伤等神经系统疾病中发挥的作用,为进一步研究脊髓损伤修复提供理论依据。方法及材料构建大鼠脊髓损伤模型,并通过脊髓损伤样品蛋白质组学分析、组织切片免疫荧光实验、qPCR实验发现脊髓损伤中的关键蛋白。通过Spastin相互作用蛋白质质谱分析其潜在的相互作用蛋白。构建Spastin及PDIA6相关原核及真核表达质粒,进行GST Pull-Down实验、CO-IP实验,明确Spastin与PDIA6存在相互作用。最后在海马神经元中过表达相关真核质粒,明确Spastin与PDIA6对海马神经元突起生长的影响。结果(1)通过脊髓损伤样品蛋白质组学分析、组织切片免疫荧光实验、qPCR实验明确PDIA6的表达量在损伤的脊髓组织中上调,并且脊髓损伤越严重,表达量越高;(2)通过Sapstin相互作用蛋白质质谱分析明确PDIA6是Spastin潜在的相互作用蛋白;(3)通过Pull-Down实验、CO-IP实验明确Spastin与PDIA6存在相互作用;(4)在原代海马神经元中分别共表达Spastin与PDIA6质粒,可以进一步促进海马神经元突起生长。结论(1)PDIA6表达量在大鼠脊髓损伤样品中上调,并且脊髓损伤越严重,表达量越高;(2)Spastin与PDIA6相互作用可以共同促进海马神经元突起生长。
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