猪繁殖与呼吸综合征（PRRS)是由PRRSV引起的，以母猪繁殖障碍、仔猪和育成猪呼吸道疾病和高死亡率为主要特征的猪传染性疾病。猪瘟是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种严重的高度接触性传染病。目前，猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟已经成为现代养猪产业中较为常见的猪传染性、病毒性疾病，尤其是当仔猪发生混合感染后，其死亡率极高，对我国的养猪业可造成极大的经济损失。所以找到一种合理快速的诊断检测的方法对防治PRRS和猪瘟具有很重要的研究意义。本研究通过对某猪场保育猪出现的急性死亡，通过临床症状观察、病理剖检和RT-PCR试验综合该病的流行病学特征、临床症状、剖检病理变化以及实验室检验等方法诊断为猪瘟病毒与猪繁殖与呼吸综合征病毒的混合感染。为更近一步确定PRRS和CSF混合感染诊断的准确性，本实验中通过实时荧光定量PCR在疾病临床检验中的应用，针对PRRSV ORF5结构蛋白和CSFV囊膜糖蛋白GP5基因分别设计了2对引物，应用Real time PCR技术对不同疑似发病猪场采集的病料进行了检测。并对Real time PCR反应条件的优化、绘制出SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线、并对其特异性、重复性进行分析。结果表明：标准曲线的线性度较好，PCR的扩增效率也比较好，得出拷贝数(x)与循环阈值(Ct)之间的线性关系曲线表达式分别为:Ct=-2.165×lg x+6.96、Ct=-2.188×lg x+7.13，而待测样品的Ct值可以从仪器读取；在重复性试验中，每次扩增的误差不到1个循环，可见Real-time PCR检测方法具有较高的可重复性，从而保证了不同样品间检测结果的可靠性和稳定性，将不同稀释度的标准品PRRSV、CSFV分别进行PCR扩增，用统计学软件分析表明，所建立的Real-time PCR在组间和组内都具有良好的重复性(P>0.05)，相关系数均大于0.99。阴性对照没有出现特性扩增。本次试验利用所优化的条件，扩增产物均为单一峰，Tm值均一，没有出现非特异性的扩增。为了提高今后对PRRSV的预防与控制效果，本研究以PRRSV的主要的保护性抗原基因ORF6为研究对象，以细胞因子IL-18基因为免疫增强分子佐剂，构建共表达PRRSV ORF6基因与细胞因子IL-18基因的重组真核质粒，并对该共表达重组质粒进行免疫学研究。研究结果显示：重组质粒pEGFP-ORF6（表达PRRSV的ORF6基因）和pEGFP-IL18-ORF6（共表达PRRSV的ORF6基因和细胞因子IL-18基因）免疫组，特异性抗体可以在首免后14d开始产生，其水平可以随时间而呈逐渐上升的趋势，但上述两个重组质粒免疫组之间产生的抗体水平差异不显著（p＞0.05）。检测中和抗体水平的结果表明只有重组质粒pEGFP-ORF6免疫组在首次免疫后的第42d，产生中和抗体水平呈低水平。检测细胞免疫水平的结果显示，共表达重组质粒pEGFP-IL18-ORF6刺激机体产生的T淋巴细胞增殖和促进细胞因子IFN-γ和IL-2的分泌的能力显著高于其他两种单表达重组质粒pEGFP-ORF6和pEGFP-IL18（p＜0.05），这表明了细胞因子IL-18作为免疫增强分子佐剂是有效地。