DNA甲基化是表观遗传学的重要修饰方式之一,DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase,DNMT）是生物体内催化DNA甲基化修饰的重要因素。为探究脊尾白虾（Exopalaemon carinicauda）DNA甲基化调控网络,本研究克隆了脊尾白虾（Exopalaemon carinicauda）DNA甲基转移酶基因家族中DNMT 1基因、DNMT 3b基因c DNA全长序列,DNMT 2基因启动子序列,对各基因的生物信息学功能进行了研究,以期为脊尾白虾DNA甲基化修饰的分子调控网络提供理论基础,以下为具体研究:1、脊尾白虾DNMT 1基因的克隆及其线粒体甲基化调控功能分析DNA甲基化修饰可以在DNA序列不发生改变的情况下,使生物体产生可遗传的表观性状,研究表明,生物体内主要负责维持已有DNA甲基化修饰的基因为DNA甲基化转移酶1（DNA methyltransferase 1,DNMT 1）。本研究通过克隆获得脊尾白虾DNMT 1基因c DNA全长序列5 719 bp,其中,5’非编码区81 bp,3’非编码区934 bp,开放阅读框4 704 bp,共翻译1 567个氨基酸（aa）,预测蛋白分子量为176.47 k Da,理论等电点为5.83。脊尾白虾DNMT 1包含4个特殊结构域,分别是DNMT 1-RFD结构域,zf-CXXC锌指结构域,BAH结构域以及Dcm结构域。氨基酸序列同源比对结果显示,脊尾白虾DNMT 1基因氨基酸序列与原螯虾（Procambarus Virginalis）DNMT 1氨基酸序列同源性最高为67.72%,对脊尾白虾DNMT 1基因在不同组织中进行实时荧光定量PCR检测发现,DNMT 1在卵巢组织中表达量最高,在心脏组织中表达量最低,对DNMT 1基因进行RNA干扰后的脊尾白虾再进行饥饿胁迫,结果表明脊尾白虾DNMT 1基因对线粒体中COX 3基因3’端序列和ND 3基因5’端序列,以及ND 5基因3’端序列DNA甲基化的调控作用并不显著。2、脊尾白虾DNMT 2基因启动子克隆及其转录调控分析通过染色体步移技术克隆得到脊尾白虾DNA甲基化转移酶2（DNA methyltransferase2,DNMT 2）基因5’端上游1 315 bp启动子序列,转录起始位点是位于ATG上游的第236个碱基“A”,在序列上游26 bp处发现TATA-box转录结合位点,分析启动子序列发现,DNMT 2基因启动子序列含有多个转录因子结合位点,包括STAT 3、NF-κB、E2F、GATA-1和SOX等,通过构建一系列缺失表达载体,利用双荧光素酶报告基因检测技术,对DNMT2基因启动子活性进行检测,结果表明,序列-196 bp～+81 bp能够维持DNMT 2基因启动子基本转录活性,为该基因核心启动子区域,-640 bp～-452 bp区域存在促进该基因表达的转录调控元件,在-940 bp～-640 bp区域存在抑制基因表达的转录调控元件。3、脊尾白虾DNMT 3b基因克隆及其线粒体甲基化调控功能分析DNA甲基化转移酶3（DNA methyltransferase 3,DNMT 3）又称为从头DNA甲基转移酶（De novo methyltransferase）,包括DNMT 3a、DNMT 3b和DNMT 3l等其它多个异构体,在生物体内的主要功能与DNA序列中新产生的甲基化位点有关,参与从头甲基化过程。本研究通过克隆获得脊尾白虾DNMT 3b基因的全长c DNA序列3 865 bp,其中5’非编码区124 bp,3’非编码区147 bp,开放阅读框3 593 bp,共翻译1 197个氨基酸（aa）,预测蛋白分子量为134.68 k Da,理论等电点为5.65。脊尾白虾DNMT 3b含有两个特殊结构域,分别是PWWP结构域和ADDz结构域。利用实时荧光定量PCR对DNMT 3b基因在脊尾白虾不同组织中的表达进行了检测,结果显示,DNMT 3b基因在脊尾白虾卵巢组织中表达量最高,在腹索神经中不表达。通过在饥饿胁迫下进行RNA干扰,利用亚硫酸氢盐测序技术,对第5天和10天的样品进行检测发现,线粒体中的COX 3基因3’端序列和ND 3基因5’端序列的甲基化程度与对照组相比均显著升高,ND 5基因3’端序列甲基化甲基化程度显著降低,结果表明,DNMT 3b基因可能参与脊尾白虾线粒体基因组的DNA甲基化修饰过程。