植物在生长发育的过程中,不可避免的遇到各种病源微生物的攻击,它们已经进化出许多防御机制来抵抗这种病源微生物的侵害,其中包括许多组成性或诱导性抗菌多肽或蛋白的合成。这些抗菌蛋白不但具有强的抗菌活性,而且抗菌谱广,在植物病害防治中越来越受重视。首先这些抗菌蛋白纯化之后可以直接用做“生化试剂”,其次可以通过测定抗菌蛋白的序列从而在原植物中克隆出其基因,这是在植物抗病基因工程中抗病基因的一个重要来源。由于这些抗菌蛋白都源于植物内源表达的基因,所以从转基因植物安全性的角度上考虑更易于被人们接受。本实验以银杏种仁为研究材料,对比了常压柱层析、离心式离子交换层析加电洗脱及AKTA Purifier层析三种蛋白分离纯化方法。最终使用AKTA Purifier层析系统,通过40%及80% (NH4)2SO4分级盐析,CM Sepharose F.F.阳离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析对银杏果仁粗提液进行了分离纯化;得到了一种抗菌蛋白,其分子量大约为13300Da左右。实验表明,纯化后的蛋白对真菌黄瓜镰刀孢菌(Fusarium oxysporum)具有明显的抑制作用。通过基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析,得到了该抗菌蛋白相应的肽质量指纹谱(PMF),通过Mascot比对NCBInr蛋白数据库,鉴定该蛋白为银杏果仁中的一种抗菌蛋白。根据质谱比对分析得到的同源序列为模板设计引物,扩增基因,并且将其克隆测序。期望通过抗菌蛋白基因的克隆、表达进一步研究其抗菌机制;本文对于作物抗病种质资源的获得和基因工程新药物的开发具有实践意义。同时,本文还探讨了针对富含淀粉、多糖、蛋白质及酚类物质的种子的RNA提取方法。