【摘 要】
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本试验通过构建铅诱导的绵羊睾丸间质细胞凋亡模型,研究硒对铅致睾丸间质细胞凋亡和氧化应激的影响,并初步探究Nrf2信号通路在该过程中的作用,为深入研究硒拮抗铅生殖毒性的分子机制提供实验依据。分离纯化绵羊睾丸间质细胞,鉴定细胞纯度后进行分组培养,试验分两个部分:（1）将绵羊睾丸间质细胞分为Control组、Pb组（40μmol/L）、Se组（2μmol/L）和Se+Pb组培养24 h;（2）用Nrf2
【基金项目】
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山西省自然科学基金项目（201901D11）； 山西省“1331工程”重点学科建设专项；
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本试验通过构建铅诱导的绵羊睾丸间质细胞凋亡模型,研究硒对铅致睾丸间质细胞凋亡和氧化应激的影响,并初步探究Nrf2信号通路在该过程中的作用,为深入研究硒拮抗铅生殖毒性的分子机制提供实验依据。分离纯化绵羊睾丸间质细胞,鉴定细胞纯度后进行分组培养,试验分两个部分:（1）将绵羊睾丸间质细胞分为Control组、Pb组（40μmol/L）、Se组（2μmol/L）和Se+Pb组培养24 h;（2）用Nrf2抑制剂ML385（5μM）将上述各组预处理12 h后培养24 h。采用CCK-8法测定细胞活率;采用DCFH-DA探针测定细胞内ROS水平;采用TBA法测定细胞MDA水平;采用q RT-PCR和western blotting技术分别检测SOD基因、细胞凋亡相关基因（Caspase3、Caspase8和Bax）和Nrf2通路及下游基因（Nrf2、HO-1、NQO1和γ-GCS）m RNA和蛋白的表达量。试验结果如下:（1）与Control组相比,Pb组细胞活率显著降低（P＜0.05）,Se组显著升高（P＜0.05）,而Se+Pb组细胞活率较Pb组显著升高（P＜0.05）。（2）与Control组相比,Pb组细胞内ROS和MDA水平显著升高（P＜0.05）,Se组ROS水平显著降低（P＜0.05）,Se+Pb组ROS和MDA水平较Pb组显著降低（P＜0.05）。Se组的SOD表达最高,而Pb组最低,Se+Pb组的SOD表达量显著高于Pb组（P＜0.05）。（3）凋亡相关基因Caspase3、Caspase8和Bax的m RNA和蛋白表达趋势一致,即在Pb组表达量最高,Se组表达量最低,Se+Pb组显著低于Pb组（P＜0.05）。（4）Nrf2及下游基因HO-1、NQO1和γ-GCS在Pb组和Se组的m RNA及蛋白表达量均显著高于对照组（P＜0.05）,且Pb组表达量显著高于Se组（P＜0.05）。（5）用ML385预处理后,相较于未做预处理的各组,Nrf2及下游基因HO-1、NQO1和GCLC的蛋白表达量均下降,ROS水平升高,凋亡相关基因蛋白表达量升高。研究表明,40μmol/L的铅造成绵羊睾丸间质细胞氧化应激,降低细胞活率,导致了细胞凋亡,并激活Nrf2通路作自身抗氧化防御反应;2μmol/L硒可以调节抗氧化酶活性和凋亡相关基因表达,激活Nrf2信号通路以拮抗铅诱导的氧化应激,缓解细胞凋亡;Nrf2通路参与调控绵羊睾丸间质细胞凋亡。
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