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目前,由于环境污染,高蛋白、高脂肪或霉变饲料的使用、抗生素和杀虫剂的滥用等因素引起的鱼类肝胆综合症在全国许多地区频繁发生,造成了鲤、鲫、草鱼、团头鲂和青鱼等多种鱼类的大面积死亡,死亡率高达60-90%,给水产养殖业造成极大的经济损失。因此,筛选保肝药物对水产动物健康养殖具有十分重要的意义。本实验通过建立体内和体外两种急性肝损伤模型,探讨了黄芪多糖(APS)对四氯化碳(CCl4)诱导鲤鱼的肝(细胞)损伤的保护和抗氧化应激的影响。主要研究内容和结果如下：1鲤鱼肝细胞原代培养：通过不同的分离方法和培养条件探索鲤鱼肝细胞的原代培养,以建立稳定的鲤鱼肝细胞原代培养模型,同时观察长期培养过程中肝细胞的形态变化。结果显示：组织块贴壁培养4-5天后细胞从组织块中迁出并增殖；机械分散法收集的细胞少,细胞存活率低；而胰蛋白酶消化法获得良好稳定的分离和培养效果。用0.1%胰蛋白酶消化30min,经台盼蓝染色和血球计数板计数,每克肝重可收集1.47×108个细胞,平均存活率为91.43%。培养基和血清浓度均会影响肝细胞的贴壁和生长。在含有10%(V/V)功胎牛血清(FCS)M199培养基中,于4%CO2、28℃培养8-9天并传代。2鲤鱼肝细胞损伤模型和在体肝损伤模型的建立：体外肝细胞损伤模型：用浓度为0、2、4、8、16和32mM/mL的CCl4损伤鲤鱼原代肝细胞,4h后,检测肝细胞的存活率和细胞上清液中的LDH、GPT、GOT、MDA和SOD。结果显示,和对照组相比,用8、16和32mM/mL的CCl4处理的细胞存活率明显降低(P<0.05或P<0.01),细胞上清液中的LDH、GPT、GOT、MDA和SOD发生显著的变化(P<0.05或P<0.01),而2和4mM/mL的CCl4对肝细胞损伤不明显。在体肝损伤模型：用浓度为0、12.5%、25%、30%和50%(V/V)的四氯化碳-植物油混合液,按5mL/kg鱼体重的剂量,腹腔注射鲤鱼,注射后的不同时间收集血清,检测肝损伤程度。结果显示,12.5%的CCl4对肝组织没有的影响,50%的CCl4会使鲤鱼致死,25%和30%的CCl4均能造成严重的肝损伤。在体外采用8mM/mL的CCl4作用4h建立肝细胞损伤模型；在体内,以30%的CCl4损伤肝组织72h建立肝损伤模型。3黄芪多糖对鲤鱼肝损伤的影响：分别利用8mM/mL的四氯化碳作用肝细胞4h及腹腔注射30%四氯化碳-植物油混合液5mL/kg来构建鲤鱼的离体肝细胞和整体肝损伤模型,通过检测肝细胞培养上清液、血清和肝组织匀浆中LDH、GOT、 GPT、MDA、GSH、SOD等生化指标的含量及肝细胞增殖活性来研究黄芪多糖((Astraga lus polysaccharides, APS)对四氯化碳诱导的急性肝(细胞)损伤的保护和抗氧化作用。实验结果表明：黄芪多糖可抑制四氯化碳损伤引起的肝细胞培养上清中GPT、GOT、LDH活性和MDA含量的升高,显著提高SOD及肝细胞的存活率(P<0.05或P<0.01)；同时在体内试验中,黄芪多糖可以显著降低四氯化碳损伤导致的血清中GPT、GOT、LDH活性升高；显著提高TP、Alb含量；显著提高肝组织匀浆中GSH含量、T-AOC和SOD活性,降低MDA含量(P<0.05或P<0.01)。该结果表明黄芪多糖对鲤鱼肝脏有保护作用,该保护作用可能与其抗氧化,清除自由基能力有关。因此,黄芪多糖可作为一种鱼类保肝和抗氧化药物。