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乳腺炎是威胁奶牛业最为频繁和损失最为严重的疾病之一,世界每年因乳腺炎的损失超过350亿美元,乳腺炎主要包括临床型和隐性乳腺炎,临床型乳腺炎可引起弃奶、奶产量暂时性减少和奶牛的过早淘汰;隐性乳腺炎可引起乳腺慢性感染从而造成奶产量长期下降。尽管国内外对乳腺炎进行了大量研究,但仍存在众多不足:首先对引起乳腺炎的病原菌缺乏系统研究;针对近些年来引起乳腺炎的主要病原菌缺少快速简捷的检测方法;尤其对目前乳腺炎的主要病原菌金黄色葡萄球菌缺少分子流行病学资料;目前国内外还缺少预防金黄色葡萄球菌效果较好的疫苗;目前我国对隐性乳腺炎还缺乏重视;我国众多奶牛散养户在顽固性乳腺炎面前束手无策等等,为探讨、解决以上问题,进行了本项研究,主要结果如下:1.对不同类型类型乳腺炎的细菌学系统分析对山东7个地区14个奶牛场做了临床型和隐性乳腺炎调查,并且采取了临床乳腺炎病牛234个乳样,隐性乳腺炎241个乳样分别做了细菌学检查,结果表明:泌乳期临床型乳腺炎病原菌以凝固酶阴性葡萄球菌,金黄色葡萄球菌、链球菌、酵母菌和棒状杆菌为主;干奶期临床型腺炎病原菌以大肠杆菌、链球菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌和酵母菌为主;隐性乳腺炎病原菌以凝固酶阴性葡萄球菌,金黄色葡萄球菌,链球菌、酵母菌、假单胞菌和棒状杆菌为主;厌氧菌在隐性乳腺炎、泌乳期临床型乳腺炎和干奶期临床型乳腺炎乳样的检出率分别为5.82%,4.17%,10.16%;引起隐性乳腺炎和干奶期乳腺炎细菌的共感染率较高,与引起泌乳期乳腺炎病原菌的共感染率差异极显著(P<0.01),引起隐性乳腺炎与引起干奶期乳腺炎病原菌的共感染率差异不显著(P>0.05)。54个顽固性乳腺炎中酵母菌(25.92%)、大肠杆菌(12.96%)、凝固酶阴性葡萄球菌(14.81%)、链球菌(12.96%)和金黄色葡萄球菌(9.26%)占有较大的比例,但有12.96%的乳区分离不到细菌。2.检测乳腺炎主要致病菌:金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母菌的多重PCR方法的建立参照Genebank发表的序列,在金黄色葡萄球菌,无乳链球菌和停乳链球菌16S rRNA与23S rRNA之间的区域设计了3对引物,参照念珠菌和隐球菌的18 S rRNA的序列设计1对引物,建立了检测金黄色葡萄球菌,无乳链球菌和停乳链球菌和酵母真菌4种乳腺炎主要致病菌的多重PCR方法,结果表明:本试验建立的多重PCR方法具