缺氧缺糖致神经元细胞损伤后NO与SDH、Caspase-3相关性研究

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目的:观察大鼠皮层神经元经缺氧缺糖处理后培养基中一氧化氮(NO)含量变化、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性变化,以及Caspase-3蛋白表达的变化。方法:(1)取新生大鼠(24h)皮层脑组织,消化后种植在六孔板内,用含10%胎牛血清的DMEM-HG培养液接种,4h后用含2%B27的Neurobasal维持培养液培养。(2)不同时间点在倒置相差显微镜下观察神经元形态变化,免疫荧光法对神经元进行鉴定。(3)原代培养8天的大鼠皮层神经元,随机分为3组:空白对照组、缺氧缺糖组,氨基胍给药组。(4)采用硝酸还原法检测培养基中NO的含量,分光光度法检测培养液中SDH活性,Western-Blot技术检测Caspase-3蛋白表达。结果:(1)成功原代培养新生大鼠皮层神经元,经免疫荧光法鉴定神经元纯度达90%以上。(2)缺氧缺糖组NO含量均较空白对照组明显增加(p<0.05),且呈现逐渐增高的趋势;与缺氧缺糖组相比,氨基胍给药组各时间点NO含量均明显减少,差异有统计学意义(p<0.05)。(3)缺氧缺糖组SDH活力较空白对照组明显降低(p<0.05),且呈现逐渐下降的趋势;与缺氧缺糖组相比,氨基胍给药组各时间点SDH活力均明显升高,差异有统计学意义(p<0.05)。(4)缺氧缺糖组Caspase-3蛋白表达均高于空白对照组(p<0.05);与缺氧缺糖组相比,氨基胍给药组Caspase-3蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(p<0.05)。结论:缺氧缺糖可导致皮层神经元一氧化氮过量产生,造成神经元的损伤;氨基胍可以抑制缺氧缺糖大鼠皮层神经元NO过量生成、SDH活力的下降以及Caspase-3的表达,从而抑制皮质神经元的凋亡,对神经元具有保护作用。
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